Статья 264 прим 1: УК РФ Статья 264.1. Управление транспортным средством в состоянии опьянения лицом, подвергнутым административному наказанию или имеющим судимость

Содержание

Генпрокуратура описала типичного нарушителя ст. 264 УК РФ

Регионы, жители которых чаще других садятся за руль подшофе, назвала 15 августа Генеральная прокуратура России. Надзорное ведомство обобщило статистику о преступлениях в сфере безопасности движения и эксплуатации транспорта и «нарисовало» примерный социальный портрет злостного нарушителя ст. 264 УК РФ (нарушение правил дорожного движения и эксплуатации транспортных средств).

По сообщению Генпрокуратуры, статистика последних трех лет свидетельствует о сокращении на 22% преступлений, предусмотренных статьей 264 УК РФ. При этом наибольшее их количество в 2017 году зафиксировано в Краснодарском, Красноярском краях, Москве, Московской и Ростовской областях. Наименьшее число подобных преступлений отмечено в республиках Ингушетия, Алтай, Магаданской области, Еврейской автономной области и Чукотском автономном округе.

В прошлом году на долю последствий преступного пренебрежения правилами дорожного движения приходился почти каждый третий погибший (31,4%) от всех уголовно наказуемых деяний, а их общее количество сопоставимо с жертвами убийств (9,6 тыс.

). В текущем году, уточняет ведомство, ситуация кардинально не поменялась. Всего же от преступлений, связанных с нарушением ПДД, за последние полтора года пострадало 37 тыс. человек, в том числе почти 16 тыс. женщин, 7,8 тыс. пожилых граждан, 3,8 тыс. несовершеннолетних. Свыше 22 тыс. лиц был причинен тяжкий вред здоровью, а в 13,3 тыс. случаях наступила смерть.

Больше всего погибших в результате таких преступлений в первом полугодии 2017 г. зафиксировано в Московской области (200), Краснодарском крае (153), Ростовской области (132), республиках Башкортостан (129) и Татарстан (107).

Вместе с тем Генпрокуратура не видит тенденцию к снижению числа ДТП, которые случились по вине водителей, находящихся в состоянии опьянения. Это связано, в частности, с тем фактом, что с момента введения 01.07.2015 в действие статьи УК, предусматривающей уголовную ответственность за нарушение ПДД лицом, подвергнутым административному наказанию, в стране зарегистрировано более 160 тыс. случаев повторного управления транспортным средством нетрезвыми водителями. В 2015 году отмечено 41 тыс. таких случаев, в 2016-м – 85 тыс., а за I полугодие 2017 года – 40 тыс.

Наибольшее число этих деяний в текущем году зафиксировано в регионах Приволжского федерального округа: Республика Башкортостан (1874), Пермский край (1422), Нижегородская область (1196) – и Сибирского федерального округа: Алтайский край (1023) и Красноярский край (1905), Кемеровская область (1225). Меньше всего данных преступлений совершено в Чеченской Республике (56), Республике Ингушетия (56), г. Севастополе (32), Еврейской автономной области (31), Ненецком (22) и Чукотском (5) автономных округах. В целом по стране за последние 3,5 года абсолютное большинство пьяных водителей (148 тыс.) подвергалось уголовному преследованию именно за повторное вождение в состоянии опьянения.

Как отмечают в ГП РФ, статистические данные позволяют описать типичный социальный портрет лиц, совершивших преступления данного типа. В большинстве своем это мужчины в возрасте от 30 до 49 лет, которые не имеют постоянного источника дохода и ранее привлекались к уголовной ответственности.

Доля иностранных граждан среди них – всего 2%, однако их абсолютное число за последние 3 года увеличилось почти вдвое (2014 г. – 968, 2016 г. – 1 811, январь-июнь 2017 г.­ – 1 006). Наибольшее число таких граждан совершало преступления на территории ЦФО, в основном в столичном регионе.

Основная масса обвинительных приговоров по преступлениям против безопасности движения и эксплуатации транспорта приходится, по данным ведомства, именно на деяния, квалифицируемые по статье 264.1 УК РФ (нарушение правил дорожного движения лицом, подвергнутым административному наказанию). Так, в 2015-2016 годах за повторное управление транспортным средством в состоянии опьянения было осуждено более 94 тыс. лиц. Подавляющему большинству из них (77,6 тыс.) в качестве наказания были назначены обязательные работы, а к штрафу приговорены 6,3 тыс. человек.

ВЫСТУПЛЕНИЕ В ПРЕНИЯХ ПО УГОЛОВНОМУ ДЕЛУ О НАРУШЕНИИ ПРАВИЛ ВОЖДЕНИЯ, ПОВЛЕКШЕМ ПО НЕОСТОРОЖНОСТИ ГИБЕЛЬ ЧЕЛОВЕКА, Т.Е. ПО Ч.4 СТ.264 УК РФ

Уважаемый суд!

          При принятии решения по настоящему уголовному делу прошу учесть следующие обстоятельства:

          — думается, что сторона обвинения так до конца и не сумела представить доказательства того, какой был механизм дорожно-транспортного происшествия, и какие именно действия совершил водитель Л.

, которые образовывали бы состав вмененного ему преступления, предусмотренного ч.4 ст.264 УК РФ;

          Признание им своей вины, которое он сделал в силу того, что является порядочным человеком, не отменяет необходимости разрешить суду вопросы при вынесении приговора, которые указаны в ст.299 УПК РФ. 

           Кроме того, обращает на себя внимание тот факт, что по делу отсутствуют какие-либо отягчающие вину обстоятельства, и имеются многочисленные смягчающие обстоятельства, к которым относятся: 

          — на протяжении 8 месяцев предварительного следствия, мой подзащитный, находясь под подпиской о невыезде, своевременно являлся на все следственные действия, продолжал добросовестно выполнять свои служебные обязанности в войсковой части, где проходит службу, т.е прилагал все усилия для своего исправления;

          — многочисленные исключительно положительные характеристики, а именно:

  • характеристика на выпускника средней общеобразовательной школы № 24 г. Перми от 24.03.2014 г.;
  • характеристика с места жительства в г.Перми от 24.03.2014 г., заверенная соседями;
  • бытовая характеристика с места жительства в г. Перми, заверенная участковым уполномоченным полиции ОП-5 УВД по г. Перми л-том полиции К.;
  • характеристика из спортивной секций по настольному теннису и футболу Муниципального автономного учреждения дополнительного образования детей «Детско-юношеского центра «Фаворит» г. Перми» от 26.03.2014 г.
  • характеристика из спортивной секции смешанных единоборств «Легион» г. Ростова-на-Дону от 31.03.2014 г.;
  • характеристика от соседей по месту жительства в г. Ростове-на-Дону.

           Думаю, что суд не должен принимать во внимание посредственную служебную характеристику на моего подзащитного и оценить ее критически, потому что, по моему мнению, она является необъективной. Ее необъективность заключается в том, что на протяжении всей предыдущей службы Л. командованием характеризовался только с положительной стороны, и только после совершенного ДТП командованием была выдана в уголовное дело посредственная характеристика.

А так не бывает, что человек на протяжении нескольких лет был хорошим и тут в одночасье стал посредственным. Думаю, что командование в связи с ДТП и гибелью военнослужащего Ш. имело неприятности по службе и данное обстоятельство негативно и необъективно отразилось на содержании служебной характеристики Л.

          Необходимо также признать в качестве смягчающего обстоятельства и состояние здоровья Л.

          Из медицинских документов, представленных стороной защиты суду, усматривается, что по результатам данного дорожно-транспортного происшествия он получил многочисленные и тяжелые телесные повреждения, находился на стационарном лечении с 28 июня по 16 октября 2013 г., освидетельствован военно-врачебной комиссией и признан ограниченно годным к военной службе. Врачами ему установлена необходимость в дальнейшем лечении.

          Кроме того, прошу суд признать также смягчающими обстоятельствами:

          — чистосердечное признание и раскаяние в содеянном;

          — наличие на иждивении малолетнего ребенка, что подтверждается свидетельством о регистрации дочери и свидетельством о ее рождении;

          — наличие на иждивении неработающей супруги, которая в настоящее время не получает пособия по безработице и ухаживает за их малолетней дочерью, что подтверждается справкой центра занятости г. Перми и копией трудовой книжки супруги;

          —  полное возмещение в ходе предварительного следствия материального и морального вреда потерпевшей, которая в связи с этим от своего гражданского иска отказалась.

          Хочу обратить внимание, что между моим подзащитным Л. и представителем потерпевшей Ш. в настоящее время достигнута также договоренность, что он будет осуществлять материальную помощь дочери погибшего пассажира Ш. и в дальнейшем. А это требует нахождения моего подзащитного в условиях отбытия наказания не в местах лишения свободы, а в условиях, позволяющих ему работать на предприятии не в изоляции от общества. 

          Кроме того, прошу суд учесть, что мой подзащитный является офицером и настоящий период, когда сложилась очень сложная международная обстановка, он может быть полезен нашему государству именно в этом качестве, а поэтому и по указанной причине оснований для применения к нему меры наказания, связанной с лишением свободы, не имеется.

          С учетом вышеизложенного, полагаю, что суд, назначив меру наказания, вполне может придти к выводу о возможности исправления Л.

без реального отбывания наказания, и может постановить считать назначенное наказание условным, как это предусмотрено ст.73 УК РФ.

          Именно об этом я и прошу суд.

          ЗАЩИТНИК – АДВОКАТ:                                                                                                                 КАРПОВ С.В.

          10 апреля 2014 г.

Законодателем ужесточена уголовная ответственность за совершение преступлений, связанных с управлением транспортным средством в состоянии опьянения

Законодателем ужесточена уголовная ответственность за совершение преступлений, связанных с управлением транспортным средством в состоянии опьянения.

17.06.2019 Президентом Российской Федерации Федеральный закон № 146-ФЗ, согласно которому внесены изменения в статью 264 Уголовного кодекса Российской Федерации (далее – УК РФ).

Новеллами предусмотрено, что в случае нарушения лицом, управляющим автомобилем или иным транспортным средством Правил дорожного движения или эксплуатации транспортных средств в состоянии опьянения, повлекшим по неосторожности причинение тяжкого вреда здоровью человека, ранее установленное наказание в виде принудительных работ на срок до 3-х лет увеличено до 5 лет, срок лишения свободы по данной части ст. 264 УК РФ увеличен с ранее максимально возможного — до 4 –х лет лишения свободы, наказанием в виде лишения свободы на срок от 3 до 7 лет.

При совершении преступления в состоянии алкогольного опьянения, повлекшим по неосторожности смерть человека, предусмотрена возможность назначения наказания в виде лишения свободы на срок от 5 до 12 лет, вместо установленного ранее наказания в виде лишения свободы на срок от 2 до 7 лет. При совершении преступления, повлекшего по неосторожности смерть двух и более лиц, установлена возможность назначения наказания на срок от 8 до 15 лет.

Этим же Федеральным законом статья 263 Уголовного кодекса РФ дополнена частями первой-прим.1 и первой-прим. 2, частью 4 , устанавливающими уголовную ответственность за нарушение правил безопасности движения и эксплуатации воздушного, морского и внутреннего водного транспорта лицом, управляющим легким (сверхлегким) воздушным судном или маломерным судном, причинившим по неосторожности причинения тяжкого вреда здоровью человека либо причинение крупного ущерба, совершение данных преступлений в состоянии алкогольного опьянения , повлекшем причинение по неосторожности тяжкого вреда здоровью либо смерть одного, двух и более лиц.

Кроме того, внесены изменения в ст.15 Уголовного кодекса РФ.

Изменения в Уголовный кодекс РФ опубликованы 17.06.2019 г. на официальном портале правовой информации РФ, вступают в силу в течение 10 дней с момента опубликования.

Помощник Балашихинского городского прокурора ,юрист 2 класса 

Т.С. Виноградова

Субдифракционная фокусировка и направление поляритонных лучей в естественном гиперболическом материале

  • 1

    Пендри, Дж. Б. Отрицательное преломление делает линзу идеальной. Phys. Rev. Lett. 85 , 3966–3969 (2000).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 2

    Фанг, Н., Ли, Х., Сан, К. и Чжан, X. Оптическое изображение с ограничением субдифракции с помощью серебряной суперлинзы. Наука 308 , 534–537 (2005).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 3

    Таубнер, Т., Коробкин, Д., Уржумов, Ю. , Швец, Г., Хилленбранд, Р. Микроскопия ближнего поля через суперлинзу из SiC. Наука 313 , 1595 (2006).

    CAS Статья Google ученый

  • 4

    Zhang, X. & Liu, Z. Суперлинзы для преодоления дифракционного предела. Nat.Матер. 7 , 435–441 (2008).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 5

    Смольянинов И. И., Хунг Ю. Дж. И Дэвис К. К. Увеличивающие суперлинзы в видимом диапазоне частот. Наука 315 , 1699–1701 (2007).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 6

    Kehr, S.C. et al. Исследование суперлинз на основе перовскита и связи зонда с объектом в ближнем поле. Nat. Commun. 2 , 249 (2011).

    CAS Статья Google ученый

  • 7

    Smith, D. R. et al. Ограничения на получение субдифракционных изображений с пластиной с отрицательным показателем преломления. заявл. Phys. Lett. 82 , 1506–1508 (2003).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 8

    Поддубный, А., Иорш, И., Белов, П., Кившарь, Ю.Гиперболические метаматериалы. Nat. Фотоника 7 , 948–957 (2013).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 9

    Гуо Ю., Ньюман В., Кортес К. Л. и Джейкоб З. Применение гиперболических метаматериальных подложек. Adv. Оптоэлектрон. 2012 , 452502 (2012).

    Артикул Google ученый

  • 10

    Хоффман, А.J. et al. Отрицательное преломление в полупроводниковых метаматериалах. Nat. Матер. 6 , 946–950 (2007).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 11

    Yao, J. et al. Оптическое отрицательное преломление в массивных метаматериалах нанопроволок. Наука 321 , 930 (2008).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 12

    Лю З., Ли, Х., Сюн, Й., Сан, К. и Чжан, X. Оптические гиперлинзы дальнего поля, увеличивающие объекты с субдифракционным ограничением. Наука 315 , 1686 (2007).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 13

    Янг, X., Яо, Дж., Ро, Дж., Инь, X. и Чжан, X. Экспериментальная реализация трехмерных неопределенных полостей на наномасштабе с аномальными законами масштабирования. Nat. Фотоника 6 , 450–454 (2012).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 14

    Аргиропулос, К., Эстахри, Н. М., Монтиконе, Ф. и Алу, А. Отрицательное преломление, усиление и нелинейные эффекты в гиперболических метаматериалах. Опт. Экспресс 21 , 15037–15047 (2013).

    ADS Статья Google ученый

  • 15

    Бис, С. А., Чикин, М., Бен-Абдалла, П. Гиперболические метаматериалы как аналог черного тела в ближнем поле. Phys. Rev. Lett. 109 , 104301 (2012).

    ADS Статья Google ученый

  • 16

    Ногинов М.А. и др. Управление спонтанным излучением с помощью метаматериалов. Опт. Lett. 35 , 1863–1865 (2010).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 17

    Гуо Ю., Кортес К. Л., Молески С. и Джейкоб З. Широкополосное супер-планковское тепловое излучение гиперболических метаматериалов. заявл. Phys. Lett. 101 , 131106 (2012).

    ADS Статья Google ученый

  • 18

    Якоб З., Смольянинов И. И., Нариманов Е. Е. Широкополосный эффект Перселла: инженерия радиационного распада с метаматериалами. заявл. Phys. Lett. 100 , 181105 (2012).

    ADS Статья Google ученый

  • 19

    Смит Д. Р., Шуриг Д., Мок Дж. Дж., Колинко П. и Рай П. Частичная фокусировка излучения пластиной неопределенной среды. заявл. Phys. Lett. 84 , 2244–2246 (2004).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 20

    Виноградов А.П., Дорофеенко А.В., Нечепуренко И.А. Анализ плазмонных блоховских волн и зонных структур одномерных плазмонных фотонных кристаллов. Метаматериалы 4 , 181–200 (2010).

    ADS Статья Google ученый

  • 21

    Фишер, Р. К. и Гоулд, Р. В. Резонансные конусы в диаграмме направленности короткой антенны в анизотропной плазме. Phys. Rev. Lett. 22 , 1093–1095 (1969).

    ADS Статья Google ученый

  • 22

    Левин Б., Грин Дж. Дж. И Гоулд Р. В. Фокусирующие резонансные конусы. Phys. Жидкости 21 , 1116–1119 (1978).

    ADS Статья Google ученый

  • 23

    Линделл И. В., Третьяков С.А., Никоскинен К.И., Илвонен С. BW медиа-среды с отрицательными параметрами, способные поддерживать обратные волны. Микроу. Опт. Technol. Lett. 31 , 129–133 (2001).

    Артикул Google ученый

  • 24

    Смит Д. Р. и Шуриг Д. Распространение электромагнитных волн в средах с неопределенными диэлектрическими проницаемостями и тензорами проницаемости. Phys. Rev. Lett. 90 , 077405 (2003).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 25

    Сиддики, О. и Элефтериадес, Г. В. Резонансно-конусная фокусировка в компенсирующем бислое непрерывных гиперболических микрополосковых сеток. заявл. Phys. Lett. 85 , 1292 (2004).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 26

    Исии, С., Кильдишев, А. В., Нариманов, Э., Шалаев, В. М., Драчев, В. П. Субволновая интерференционная картина от объемных плазмонных поляритонов в гиперболической среде. Laser Photonics Ред. 7 , 265–271 (2013).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 27

    Тонграттанасири, С., Подольский, В. А. Гиперрешетки: нанофотоника в плоских анизотропных метаматериалах. Опт. Lett. 34 , 890–892 (2009).

    ADS Статья Google ученый

  • 28

    Исии С., Драчев В. П., Кильдишев А. В. Дифракционные линзы с нанощелями для субволновой фокусировки. Опт. Commun. 285 , 3368–3372 (2012).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 29

    Rho, J. et al. Сферическая гиперлинза для двумерного субдифракционного изображения в видимых частотах. Nat. Commun. 1 , 143 (2010).

    Артикул Google ученый

  • 30

    Якоб, З., Алексеев, Л. В., Нариманов, Э. Оптические гиперлинзы: получение изображений в дальней зоне за дифракционным пределом. Опт. Экспресс 14 , 8247–8256 (2006).

    ADS Статья Google ученый

  • 31

    Саландрино, А. и Энгета, Н. Субдифракционная оптическая микроскопия в дальней зоне с использованием кристаллов метаматериалов: теория и моделирование. Phys. Ред. B 74 , 075103 (2006).

    ADS Статья Google ученый

  • 32

    Лю, Д. и Лю, З. Гиперлинзы и метализы для получения изображений сверхвысокого разрешения в дальней зоне. Nat. Commun. 3 , 1205 (2012).

    ADS Статья Google ученый

  • 33

    Dai, S. et al. Перестраиваемые фононные поляритоны в атомарно тонком ван-дерваальсовом кристалле нитрида бора. Наука 343 , 1125–1129 (2014).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 34

    Caldwell, J. D. et al. Субдифракция, объемные поляритоны в естественном гиперболическом материале, гексагональном нитриде бора. Nat. Commun. 5 , 5221 (2014).

    CAS Статья Google ученый

  • 35

    Гейм, А.К.& Григорьева, И. В. Ван-дер-ваальсовые гетероструктуры. Природа 499 , 419–425 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 36

    Фоглер М. М., Бутов Л. В., Новоселов К. С. Высокотемпературная сверхтекучесть с непрямыми экситонами в гетероструктурах Ван-дер-Ваальса. Nat. Commun. 5 , 4555 (2014).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 37

    Сюй, Х.G. et al. Одномерные поверхностные фононные поляритоны в нанотрубках нитрида бора. Nat. Commun. 5 , 4782 (2014).

    CAS Статья Google ученый

  • 38

    Тарханян, Р. , Узуноглу, Н. Радиоволны и поляритоны в анизотропных средах: одноосные полупроводники Wiley: Hoboken (2006).

  • 39

    Новотны, Л. и Хехт, Б. Принципы нанооптики Cambridge Univ.Пресса (2006).

  • 40

    Аткин, Дж. М., Бервегер, С., Джонс, А. К. и Рашке, М. Б. Нанооптическое отображение и спектроскопия порядка, фаз и доменов в сложных твердых телах. Adv. Phys. 61 , 745–842 (2012).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 41

    Чавес, Дж. Введение в невизуальную оптику CRC Press (2008).

  • 42

    Chen, J. et al. Оптическое наноизображение перестраиваемых затвором графеновых плазмонов. Природа 487 , 77–81 (2012).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 43

    Fei, Z. et al. Настройка затвора графеновых плазмонов, обнаруженная с помощью инфракрасного наноизображения. Природа 487 , 82–85 (2012).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 44

    Woessner, A. et al. Сильно ограниченные плазмоны с малыми потерями в гетероструктурах графен-нитрид бора. Nat. Матер. 487 , 82–85 (2015).

    Google ученый

  • 45

    Li, P. et al. Гиперболические фонон-поляритоны в нитриде бора для получения оптических изображений в ближней зоне. (2015) http://arxiv.org/abs/1502.04093.

  • 46

    Болтассева А. и Этуотер Х. Плазмонные метаматериалы с низкими потерями. Наука 331 , 290–291 (2011).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 47

    Тассин, П., Koschny, T., Kafesaki, M. & Soukoulis, C. Сравнение графена, сверхпроводников и металлов как проводников для метаматериалов и плазмоники. Nat. Фотоника 6 , 259–264 (2012).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 48

    Хургин, Дж. Б. и Болтассева, А. Размышления о потерях в плазмонике и метаматериалах. MRS Bull. 37 , 768–779 (2012).

    CAS Статья Google ученый

  • 49

    Кейлманн, Ф.И Amarie, S. Гребенка средней инфракрасной области, охватывающая октаву, на основе Er волоконного лазера и генерации разностной частоты. J. Инфракрасные миллиметровые терагерцовые волны 33 , 479–484 (2012).

    CAS Статья Google ученый

  • 50

    Ватанабе, К., Танигучи, Т. и Канда, Х. Свойства прямой запрещенной зоны и доказательства ультрафиолетовой генерации монокристалла гексагонального нитрида бора. Nat. Матер. 3 , 404–409 (2004).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • Обработка Streptococcus mutans антисмысловыми олигодезоксирибонуклеотидами к мРНК gtfB ингибирует экспрессию и функцию GtfB | Письма о микробиологии FEMS

    Абстрактные

    Мы исследовали эффекты модифицированных фосфоротиоатом антисмысловых олигодезоксирибонуклеотидов (PS-ODN), нацеленных на мРНК, транскрибируемую из gtfB , которая кодирует синтез нерастворимых в воде глюканов в Streptococcus mutans . Обработка S. mutans 10 мкМ антисмысловых PS-ODN ингибировала транскрипцию мРНК gtfB , экспрессию GtfB и синтез нерастворимого в воде глюкана. Архитектура биопленок, образованных антисмысловыми PS-ODN-обработанными S. mutans , показала уменьшенную биомассу, более диспергированное распределение с увеличенными промежутками и меньшее количество слоев прикрепленных клеток. Обработка PS-ODN не влияла на рост S. mutans . Наши результаты показали, что можно было бы использовать антисмысловые PS-ODN в качестве нового средства для профилактики кариеса.

    Введение

    Streptococcus mutans является основным этиологическим агентом кариеса зубов. Колонизация кариесогенных микроорганизмов на поверхности зубов считается первым шагом в развитии кариеса зубов (Hamada & Slade, 1980). Связанные с бактериальными клетками белки, которые опосредуют взаимодействие между S. mutans и хозяином, поэтому часто становятся мишенями в качестве кандидатов на вакцины (Smith et al., , 2003; Rhodin et al., 2004). Большинство штаммов S. mutans несут три различных гена gtf , gtfB, gtfC и gtfD , экспрессирующие GtfB, GtfC и GtfD, соответственно. Они опосредуют прочное прикрепление S. mutans к поверхности зубов и его накопление путем синтеза нерастворимого в воде глюкана и водорастворимого глюкана (Munro et al. , 1991; Yamashita et al. , 1993). Анализ последовательности показал, что эти три гена gtf и их продукты демонстрируют высокий уровень гомологии нуклеотидных и аминокислотных последовательностей (Fujiwara et al., 1998). Сообщалось, что снижение кариесогенности штамма с дефицитом gtf было связано с уменьшением прилипания S. mutans к поверхности зубов (Fukushima et al. , 1992). Fujiwara (1996) инактивировал gtfB и / или gtfC из S. mutans MT8148 посредством инсерционного мутагенеза путем аллельного обмена и обнаружил, что сахарозозависимая адгезия этих мутантов была значительно ниже, чем у их родительского штамма.Повторное введение gtfB и / или gtfC в соответствующие мутанты с дефектом может в основном восстановить сахарозозависимую способность этих штаммов к сцеплению. Ингибирование активности Gtf может иметь потенциальное применение для профилактики кариеса зубов (Younson & Kelly, 2004).

    Селективное нарушение и / или подавление экспрессии генов — широко используемые инструменты для выяснения информации о генах, которые необходимы для роста бактерий, патогенности и генной терапии (Geller, 2005).Было показано, что антисмысловая технология является эффективным средством контроля экспрессии генов и эффективно используется для подавления экспрессии эукариотических генов в различных системах (Donk et al. , 2006). Антисмысловое явление естественным образом встречается у бактерий, но антисмысловые технологии редко используются у бактерий. Основным препятствием на пути использования антисмысловых олигонуклеотидов является неэффективная скорость захвата олигодезоксирибонуклеотидов (ODN) клетками бактерий-мишеней из-за ограничения, налагаемого барьером клеточной стенки.Для преодоления этого барьерного сопротивления мембраны были разработаны различные методы, среди которых катионный полимер был одним из наиболее широко используемых. Недавние сообщения продемонстрировали, что антисмысловой подход с использованием различных синтетических или экспрессированных олигомеров может быть многообещающим средством разработки нового химиотерапевтического агента против инфекционных заболеваний (Harth et al. , 2000; Wang & Kuramitsu, 2003; Tan et al. , 2005 ). Более того, антисмысловая стратегия может позволить нацеливаться на гены с множественными копиями или гомологами генов (Bennett & Cowsert, 1999).Эта работа была разработана для определения возможности введения gtfB -специфических антисмысловых олигонуклеотидов в S. mutans и для наблюдения эффектов антисмысловых олигонуклеотидов на транскрипцию мРНК gtfB , экспрессию и активность GtfB. Также наблюдалось влияние фосфоротиоата (ФС) -ODN на образование биопленок.

    Материалы и методы

    Штамм бактерий и условия культивирования

    Streptococcus mutans GS-5 выращивали в виде стоячей ночной культуры при 37 ° C анаэробно в бульоне Тодда Хьюитта (THB, Difco), хранили в Brain Heart Infusion (BHI) (Difco) с добавлением 25% стерильного глицерина при -70 ° C.BHI, содержащий 1,5% агара, использовали для восстановления бактерий. THB с добавлением 10% инактивированной нагреванием (56 ° C, 30 мин) лошадиной сыворотки (Gibco, NY) использовали для получения генетически компетентных клеток (THBS). Streptococcus mutans Клетки поддерживали в THB с добавлением сахарозы для исследования с помощью сканирующей электронной микроскопии. Для выделения ассоциированного с клеткой белка и общей РНК S. mutans выращивали в THBS с добавлением 0,3% дрожжевого экстракта.

    Подбор и подготовка ПС-ОДН

    Были выбраны два сайта-мишени для связывания антисмыслового ODN.Один сайт был расположен рядом с исходной кодовой областью (ODN1: 5′-acgcactttcttgtccat-3 ′), другой — в каталитическом домене (ODN2: 5′-acccagtcagccattacct-3 ′), что соответствует 709–726 п.н. и 3479–3497 п.н. гена gtfB (номер доступа в GenBank: M17361) соответственно. Был разработан несовпадающий ODN (ODN3: 5′-acgctctttcttatcaat-3 ‘) и использован в качестве контроля. Не было обнаружено очевидного сходства между PS-ODN и gtfC и gtfD путем выравнивания последовательности ДНК с использованием bl2seq (http: // www.ncbi.nlm.nih.gov). Все межнуклеотидные связи были фосфоротиоатными. PS-ODN были синтезированы Shanghai Songon. Исходный раствор PS-ODN готовили с использованием стерильной бидистиллированной воды (DDW) и хранили при -20 ° C. Непосредственно перед использованием к раствору добавляли 2 × THB (1: 1, об. / Об.). Наконец, So-Fast ™ (Taiyangma, Xiamen, China), реагент для трансфекции, состоящий из катионного полимера, который, как было показано в нашем предварительном исследовании, в THB, заметно улучшает проникновение PS-ODN в клетки S. mutans (1: 20, об. / Об.) Добавляли к раствору ПС-ОДН и инкубировали при комнатной температуре 20–30 мин.

    Трансформация

    S. mutans

    Трансформацию S. mutans проводили, как ранее сообщал Perry (1983). PS-ODN добавляли к компетентным культурам соответственно. So-Fast ™ или THB равного объема были добавлены в качестве контроля. Если не указано иное, PS-ODN добавляли до конечной концентрации 10 мкМ.

    Выделение РНК

    Аликвоты удаляли с интервалами 1, 2 и 8 ч из полученных культур.Тотальную РНК выделяли из S. mutans для последующей ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) с использованием модифицированного одностадийного метода. Вкратце, бактериальные клетки собирали центрифугированием (4300 g в течение 5 минут при 4 ° C) и один раз промывали водой, обработанной 0,1% диэтилпирокарбонатом (DEPC) (Sigma). Лизис бактерий проводили, как описано ранее (Shiroza & Kuramitsu, 1993). РНК экстрагировали реагентом Tri (Центр молекулярных исследований) в соответствии с инструкциями производителя.РНК растворяли в стерильной воде, обработанной DEPC, проверяли на целостность и чистоту с помощью 1,2% -ного электрофореза в агарозе и количественно определяли с помощью спектрофотометра Ultrospec 3300 pro (Amersham Biosciences, Швеция) при 260 нм.

    ОТ-ПЦР

    ОТ-ПЦР использовали для характеристики транскрипции мРНК gtfB из S. mutans . В частности, набор для синтеза первой цепи кДНК (MBI, Fermentas, Life Science, Литва) использовали для амплификации 2 мкг обработанной ДНКазой тотальной РНК, выделенной из полученных культур в соответствии с рекомендациями поставщика. ПЦР выполняли с набором праймеров gtfB / F1 (5′-acaaccgaagc / tgacatctaagca-3 ‘) и gtfB / R1 (5′-acgaactttgccgttattattgtcat-3′), который был разработан для отжига с внутренней кодирующей областью. из gtfB (903–1247 п.н.). Был процитирован набор праймеров recA / F1 (5′-ccggaatcttctggtaag-3 ‘) и recA / R1 (5′-ctaattcacctgtacgag-3′), соответствующий гену recA из S. mutans . в качестве внутреннего контроля (Fujiwara et al. , 2002).Ожидаемый размер для каждого продукта ПЦР из gtfB и recA составлял 345 и 692 п.н. соответственно. Праймеры в конечной концентрации 0,5 мкМ добавляли к каждой реакционной смеси 2 × Taq PCR MasterMix (Tian Wei Shi Dai, Китай) в соответствии с инструкциями производителя. Реакционные смеси подвергали ПЦР-амплификации со следующим протоколом термоциклирования: 95 ° C в течение 5 минут для начальной денатурации, затем 35 циклов из трех этапов, состоящих из 95 ° C в течение 45 секунд, 56 ° C в течение 45 секунд, 72 ° C. C в течение 45 с и окончательное удлинение при 72 ° C в течение 10 минут в термоциклере (система GeneAmp PCR 9700, Applied Biosystem, Сингапур).Продукты ПЦР разделяли гель-электрофорезом с 2% агарозой и визуализировали окрашиванием бромидом этидия (Dolphin-DOC, Wealtec).

    Выделение ассоциированного с клеткой белка

    Полученные клеток S. mutans , выращенные в течение 8 часов, собирали центрифугированием (4300 g , 5 минут, 4 ° C) и ресуспендировали в 2-кратном буфере для крекинга, как описано Hazlett (1998). Полученные лизаты очищали центрифугированием (10 000 г , 10 мин, 4 ° C).Концентрацию белка определяли методом Брэдфорда с использованием бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта.

    Электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) и определение активности GtfB

    Streptococcus mutans ассоциированных с клетками белков (16 мкг на дорожку) разделяли на денатурирующем градиентном геле (5–7,5%) с помощью SDS-PAGE при 4 ° C в двух экземплярах (Mini. VE Hoefer, Amersham Biosciences, Швеция) . Один гель окрашивали 0,1% кумасси бриллиантовым синим (CBB) (Sigma), и интенсивность полосы измеряли сканирующим денситометром (Docdel 2000, BioRad).Другой гель использовали для определения активности GtfB. Гель элюировали 50 мМ трис-HCl (pH 7,5), инкубировали в 50 мМ натрий-фосфатном буфере, содержащем 1% сахарозы, 1% Triton-X 100% и 0,04% декстрана T-10 (pH 6,5) при 37 ° C в течение 18 ч. Затем его пропитали реактивом Шиффа на 60 минут (Hung и др. , 2002) и сфотографировали на белом фоне. Описанные выше эксперименты повторяли трижды.

    Выделение и анализ нерастворимых в воде глюканов

    После выращивания в течение 8% ч реципиенту добавляли 50% стерильную сахарозу S.mutans до конечной концентрации 1% и бактериям позволяли расти еще в течение 1 часа. Клетки собирали и трижды промывали стерильным DDW. Осадок ресуспендировали в 0,5 М NaOH и инкубировали при 37 ° C при вращении со скоростью 250 об / мин. на 5 мин. После центрифугирования (10 000 г , 4 ° C, 10 мин) супернатант собирали. Эту процедуру повторяли трижды, и супернатант объединяли. Нерастворимые глюканы в супернатантах выделяли добавлением 3 объемов холодного 100% этанола и инкубировали в течение ночи при 4 ° C.Смесь центрифугировали при 12 000 g в течение 5 минут при 4 ° C и осадок растворяли в 0,5 М NaOH. Общее количество нерастворимых глюканов измеряли фенол-сернокислотным методом (Dubois et al. , 1956) при 488 нм с глюкозой в качестве стандарта. Каждый эксперимент проводили в трех экземплярах и повторяли трижды.

    Морфологическое наблюдение

    биопленки S. mutans

    Архитектура С.mutans наблюдали с помощью сканирующего электронного микроскопа (SEM, GSE-80, Япония). Рост биопленки инициировали на дне 24-луночного планшета (Costar), как описано ранее (Loo et al. , 2000). Свободные PS-ODN, So-Fast ™ и комбинация PS-ODN с So-Fast ™ добавляли в разные лунки соответственно и инкубировали при 37 ° C. Через 2 ч инкубации в каждую лунку добавляли стерильную 50% сахарозу до конечной концентрации 1%. После 18 ч инкубации биопленки один раз промывали 10 мМ фосфатно-солевым буфером (PBS), фиксированными в 3.7% формальдегид в 10 мМ PBS при комнатной температуре в течение ночи. Биопленки исследовали с помощью SEM.

    Анализ роста

    S. mutans

    Рост бактерий определяли путем измерения оптической плотности (OD) при 540 нм с помощью спектрофотометра. OD контролировали с интервалом в 1 час в течение 24 часов. Эксперимент по выращиванию проводили в трех повторностях, и значения представляли собой среднее значение трех определений.

    Статистический анализ

    Анализ данных был выполнен с помощью anova с использованием SPSS 11. 0. Различия считались статистически значимыми, когда было получено значение P ≤0,05.

    Результаты

    Влияние PS-ODN на транскрипцию

    gtfB

    Эффекты PS-ODN на транскрипцию gtfB показаны на рис. 1. Не наблюдалось значительных различий в транскрипции мРНК gtfB между разными группами лечения через 1 час (рис. 1a) и 2 часа (рис. 1b). . Через 8 часов PS-ODN1 (дорожка 1) и PS-ODN2 (дорожка 2) сильно ингибировали транскрипцию gtfB , тогда как несовпадающий PS-ODN3 (дорожка 3) проявлял лишь незначительный ингибирующий эффект.Однако So-Fast ™ (дорожка 4) не оказывал ингибирования на транскрипцию gtfB (фиг. 1c). Сигнал ПЦР не был обнаружен в отсутствие реакции обратной транскрипции (данные не показаны).

    1

    Транскрипция gtfB после обработки PS-ODN. Ожидаемый размер recA составляет 692 п. н., а gtfB — 345 п.н. (а) Через час после лечения. (б) Через два часа после лечения. (c) Через восемь часов после лечения. Дорожка 1. ПС-ОДН1; Дорожка 2.ПС-ОДН2; Дорожка 3. ПС-ОДН3; Дорожка 4. So-Fast ™; Дорожка 5. Контроль. М. 100-п.н. ДНК-лестница (TaKaRa, Япония).

    1

    Транскрипция gtfB после обработки PS-ODN. Ожидаемый размер recA составляет 692 п.н., а gtfB — 345 п.н. (а) Через час после лечения. (б) Через два часа после лечения. (c) Через восемь часов после лечения. Дорожка 1. ПС-ОДН1; Дорожка 2. ПС-ОДН2; Дорожка 3. ПС-ОДН3; Дорожка 4. So-Fast ™; Дорожка 5. Контроль. М. 100-п.н. ДНК-лестница (TaKaRa, Япония).

    Влияние PS-ODN на экспрессию GtfB

    Интенсивность полос GtfB в разных группах обработки была выявлена ​​с помощью SDS-PAGE (рис.2а) и сканирующая денситометрия. Средние значения пикселей полос GtfB, определенные сканирующим денситометром, показаны в таблице 1. PS-ODN1, PS-ODN2 и PS-ODN3 ингибировали экспрессию GtfB на 41,32%, 41,94% и 17,88% соответственно. Различия между антисмысловыми и несовпадающими PS-ODN были статистически значимыми ( P <0,01). Однако PS-ODN3 показал лишь небольшой ингибирующий эффект ( P > 0,05). Подобные ингибирующие эффекты наблюдались между группами PS-ODN1 и PS-ODN2 ( P > 0.05).

    2

    Профиль электрофореза клеточно-ассоциированных белков Streptococcus mutans . Положения полос GtfB и полос активности GtfB указаны стрелками. (а) Равные количества ассоциированных с клетками белков были разделены с помощью SDS-PAGE и окрашены CBB. (b) In situ определение активности GtfB. Гель инкубировали с сахарозой и буфером Triton X-100 и, наконец, с реактивом Шиффа. После инкубации гель фотографировали на белом фоне.Дорожка 1. ПС-ОДН1; Дорожка 2. ПС-ОДН2; Дорожка 3. PS-ODN3; Дорожка 4. So-Fast ™; Дорожка 5. Контрольная; Стандарты молекулярной массы белков M. (TaKaRa, Япония).

    2

    Профиль электрофореза клеточно-ассоциированных белков Streptococcus mutans . Положения полос GtfB и полос активности GtfB указаны стрелками. (а) Равные количества ассоциированных с клетками белков были разделены с помощью SDS-PAGE и окрашены CBB. (b) In situ определение активности GtfB. Гель инкубировали с сахарозой и буфером Triton X-100 и, наконец, с реактивом Шиффа.После инкубации гель фотографировали на белом фоне. Дорожка 1. ПС-ОДН1; Дорожка 2. ПС-ОДН2; Дорожка 3. PS-ODN3; Дорожка 4. So-Fast ™; Дорожка 5. Контрольная; Стандарты молекулярной массы белков M. (TaKaRa, Япония).

    1

    Интенсивность полос GtfB в разных группах лечения

    Группы Интенсивность (средние пиксели)
    PS-ODN1 9,86
    PS-ODN2 90.76
    PS-ODN3 13,80
    So-Fast ™ 14,68
    Control 16. 80

    1 907 среднее 907

    PS-ODN1 9,86
    PS-ODN2 9,76
    PS-ODN3 13,80
    So-Fast ™ 14.68
    Контроль 16.80
    1

    Интенсивность полос GtfB в разных группах лечения

    NN
    Группы Интенсивность (среднее количество пикселей)
    PS-ODN2 9,76
    PS-ODN3 13,80
    So-Fast ™ 14,68
    Control 16.80
    7
    Группы Интенсивность (средние пиксели)
    PS-ODN1 9,86
    PS-ODN2
    So-Fast ™ 14,68
    Контроль 16.80

    Влияние PS-ODN на активность GtfB

    При определении активности Gtf, связанной с клетками in situ , полосы как GtfB, так и GtfC были обнаружены в PS-ODN3, So-Fast ™ и контрольных группах (рис. 2b, дорожки 3, 4,5), тогда как только полоса GtfB была обнаружена в обработанных PS-ODN1 и PS-ODN2 S. mutans (фиг. 2b, дорожки 1, 2). Кроме того, полосы активности GtfB в антисмысловых группах PS-ODN были слабее, чем в других группах (рис. 2b). Количественный анализ показал, что обработанные как PS-ODN1, так и PS-ODN2 S. mutans синтезировали гораздо более низкие уровни нерастворимых в воде глюканов по сравнению с PS-ODN3, So-Fast ™ и контрольными группами ( P <0,05). Однако аналогичные уровни синтеза водонерастворимых глюканов наблюдались между группами PS-ODN1 и PS-ODN2 ( P > 0.05) (таблица 2).

    2

    Нерастворимые в воде глюканы, синтезированные разными группами обработки

    Группы Концентрация нерастворимых в воде глюканов (мкг / мл)
    PS-ODN1 424,4 ± 14,0 90-65 ODN2 545,0 ± 9,3
    PS-ODN3 892,6 ± 15,06
    So-Fast ™ 1027,5 ± 10,5
    Контроль 1011. 3 ± 7,8
    9,3 907 998
    Группы Концентрация нерастворимых в воде глюканов (мкг / мл)
    PS-ODN1 424,4 ± 14,0
    ПС-ОДН3 892,6 ± 15,06
    So-Fast ™ 1027,5 ± 10,5
    Контроль 1011,3 ± 7,8
    Нерастворимые в воде группы

    62 Контроль
    Группы Концентрация нерастворимых в воде глюканов (мкг / мл)
    PS-ODN1 424.4 ± 14,0
    PS-ODN2 545,0 ± 9,3
    PS-ODN3 892,6 ± 15,06
    So-Fast ™ 1027,5 ± 10,5
    9070 ± 9,3 PS-ODN3

    98 формация

    Исследование

    SEM показало, что архитектура биопленок различалась в группах, обработанных PS-ODN, PS-ODN, обработанных So-Fast ™, обработанных So-Fast ™, и контрольных группах (фиг. 4). Толщина, биомасса и плотность биопленки, образованной свободными антисмысловыми PS-ODN, обработанными S.mutans были уменьшены. Комбинация антисмысловых PS-ODN с So-Fast ™ оказывала еще больший ингибирующий эффект на образование биопленок (рис. 3).

    4

    Рост Streptococcus mutans в среде THB при различных обработках. □. ПС-ОДН1; ▪. ПС-ОДН2; ▲. PS-ODN3; × So-Fast ™; * . Контроль. Оптическую плотность культуры контролировали при 540 нм с помощью спектрофотометра.

    4

    Рост Streptococcus mutans в среде THB при различных обработках.□. ПС-ОДН1; ▪. ПС-ОДН2; ▲. PS-ODN3; × So-Fast ™; * . Контроль. Оптическую плотность культуры контролировали при 540 нм с помощью спектрофотометра.

    3

    Сканирующие электронные микрофотографии биопленок, образованных различным образом обработанными Streptococcus mutans . Изображения были увеличены с увеличением × 1000.

    3

    Сканирующие электронные микрофотографии биопленок, образованных различным образом обработанным Streptococcus mutans . Фотографии были увеличены в 1000 раз.

    Влияние PS-ODN на рост

    S. mutans

    Рост обработанных PS-ODN и So-Fast ™ S. mutans оценивали в независимом исследовании роста. Фиг.4 показывает, что различные обработки S. mutans не влияли на рост бактерий в течение 24 часов.

    Обсуждение

    Gtfs состоят из четырех отдельных структурных доменов. Их N-конец начинается с сигнального пептида, за которым следует область, которая очень вариабельна.Они представляют собой высококонсервативную сердцевинную область, а именно каталитический домен, который способен связывать и расщеплять сахарозу. С-конец состоит из серии тандемных повторов и составляет глюкан-связывающий домен (Monchois et al. , 1999).

    На основе доступной нуклеотидной последовательности gtfB из S. mutans с помощью Vector NTI 5.0 были выбраны два сайта-мишени. Были соблюдены принципы конструирования антисмысловых олигонуклеотидов, и взаимосвязь между структурой и функцией Gtf также учитывалась при конструировании антисмыслового ODN.Обилие литературы указывает на то, что фосфоротиоатные олигонуклеотиды не только служат в качестве эффективных субстратов (в сочетании с РНК) для ферментов РНКазы Н, но также повышают скорость ее поглощения и стабильность клетками (Baker & Monia, 1999). Следовательно, в этой работе использовались PS-ODN.

    В настоящем исследовании было обнаружено, что антисмысловые PS-ODN ингибируют транскрипцию мРНК gtfB , экспрессию и активность GtfB, а также образование биопленок S. mutans . Эффекты антисмысловых PS-ODN были высокоспецифичными, поскольку несовпадающие PS-ODN не оказывали влияния на S.mutans в тех же условиях. Наши результаты предполагают, что PS-ODN могут проникать в клетки S. mutans . Механизм, с помощью которого антисмысловые PS-ODN ингибируют экспрессию GtfB и последующий синтез нерастворимого в воде глюкана, вероятно, включает: (1) связывание их родственных мишеней, тем самым блокируя процессинг и трансляцию РНК; (2) быть субстратом для РНКазы Н при образовании дуплекса ДНК-РНК; (3) подавление транскрипции гена за счет образования тройной спирали между олигомером и двойными цепями (Stein et al. , 2005).

    Наши результаты продемонстрировали, что эффекты двух антисмысловых PS-ODN на S. mutans были одинаковыми, что подтверждает предположение Wang & Kuramitsu (2005) о том, что размер, а не относительное положение, антисмыслового фрагмента ДНК важен в опосредовании антисмыслового феномена. Ингибирующий эффект антисмысловых PS-ODN на активность GtfB был подтвержден посредством определения активности Gtf, связанной с клетками in situ, и измерения нерастворимого в воде глюкана.Снижение активности фермента коррелировало со сниженным уровнем GtfB, что было выявлено с помощью SDS-PAGE и сканирующей денситометрии. Интересно отметить, что полосы как GtfB, так и GtfC наблюдались в группах PS-ODN3, So-Fast ™ и контрольных группах, тогда как только полоса GtfB наблюдалась в группах PS-ODN1 и PS-ODN2. В настоящее время мы не можем объяснить это явление, и эту проблему необходимо решать в будущем.

    Зубной налет представляет собой биопленку из прилипших бактериальных клеток, разделенных заполненными жидкостью пространствами и встроенных в капсульный полисахаридный матрикс (Li et al. , 2002). Ли (2001) сообщил, что клетки S. mutans , растущие в биопленках, были способны встраивать чужеродную ДНК гораздо эффективнее, чем их свободноживущие аналоги. Частота естественной трансформации клеток, выращенных на биопленке, была в 10-600 раз выше, чем у планктонных клеток. В этом исследовании как свободные PS-ODN, так и комбинация свободных PS-ODN с So-Fast ™ были использованы для наблюдения их дифференциального воздействия на образование биопленок. Результат показал, что свободные антисмысловые PS-ODN проявляли относительно более слабые ингибирующие эффекты по сравнению с комбинацией свободных антисмысловых PS-ODN с катионным полимером So-Fast ™.Возможное объяснение этого явления может заключаться в том, что свободные антисмысловые PS-ODN не могут эффективно поглощаться бактериальными клетками. Однако использование высоких концентраций PS-ODN (> 10 мкМ) невозможно из-за риска неспецифического взаимодействия с последовательностями с белками и нуклеиновыми кислотами (Harth et al. , 2000). Утверждалось, что положительно заряженные полимеры могут нейтрализовать отрицательно заряженные PS-ODN, а также обеспечивать достаточный остаточный заряд для взаимодействия с клеточной мембраной, таким образом, способные облегчить интернализацию PS-ODN (Chirila et al., 2002). В нашем исследовании было обнаружено, что свободный PS-ODN в сочетании с So-Fast ™ проявляет более сильный ингибирующий эффект на образование биопленок S. mutans . Наши результаты подтвердили Chirila et al. Взгляд . Поскольку представляется, что транспорт Gtf зависит от нормальной движущей силы протона (Markevics & Jacques, 1985), возможно, что комбинация PS-ODN с So-Fast ™ может быть ответственной за снижение трансляции gtfB и нарушение нормальная мембранная функция.

    Предыдущие исследования показали, что GtfB может играть определенную роль в сахарозозависимой адгезии и влиять на плотность и когезию S. mutans в биопленке (Munro et al. , 1991; Fukushima et al. , 1992; Fujiwara и др. , 1996; Ван и Курамицу, 2005). В этом исследовании наблюдалось изменение архитектуры биопленок под действием антисмысловой обработки PS-ODN, включая уменьшение биомассы, более диспергированное распределение с увеличенными промежутками и меньшее количество слоев прикрепленных клеток.Это может быть благоприятным для буферного действия слюны и может снизить ацидогенный потенциал S. mutans в среде бляшек. Thurnheer (2006) подтвердил, что замена S. mutans дикого типа мутантом gtfC — привела к увеличению коэффициента диффузии макромолекул в смешанной биопленке полости рта. Кроме того, транспортировка питательных веществ и продуктов жизнедеятельности через увеличенные промежутки может ослабить индуцированный S. mutans кариесогенез. Поскольку обработка PS-ODN не влияла на скорость роста, можно предположить, что наблюдаемые различия в транскрипции gtfB , экспрессии и активности GtfB, а также в образовании биопленок бактерий не были связаны с различиями в росте бактерий. Настоящее исследование показало, что возможно использовать модифицированные устойчивые к нуклеазе антисмысловые PS-ODN в качестве новой технологии против S. mutans .

    В заключение, настоящее исследование является первым, в котором наблюдалось влияние антисмысловых PS-ODN против gtfB на транскрипцию gtfB , экспрессию и активность GtfB, а также на образование биопленок у S. mutans . Антисмысловой PS-ODN может быть использован в качестве нового реагента против кариесогенеза S. mutans .Однако эффекты антисмысловых PS-ODN на животных моделях необходимо изучить, чтобы выяснить антикариогенную роль измененной архитектуры биопленок.

    Благодарности

    Мы благодарим доктора Юань-Мин Ву и Чун-Донг Чжан за их помощь в разработке олигонуклеотидов. Авторы благодарны доктору Бао-янь Вану за его помощь в СЭМ-фотографии.

    Список литературы

    (

    1999

    )

    Новые механизмы антисмысловой регуляции экспрессии генов

    .

    Biochim Biophys Acta

    1489

    :

    3

    18

    .

    (

    1999

    )

    Антисмысловые олигонуклеотиды как инструмент для функционализации генов и проверки мишеней

    .

    Biochim Biophys Acta

    1489

    :

    19

    30

    .

    (

    2002

    )

    Использование синтетических полимеров для доставки терапевтических антисмысловых олигодезоксинуклеотидов

    .

    Биоматериалы

    23

    :

    321

    342

    .

    (

    2006

    )

    Новые стратегии лечения множественной миеломы, нацеленные на BCL-2 и мевалонатный путь

    .

    Curr Pharm Des

    12

    :

    327

    340

    .

    (

    1956

    )

    Колориметрический метод определения сахаров и родственных веществ

    .

    Anal Chem

    28

    :

    350

    356

    .

    (

    1996

    )

    Делеция и повторное введение генов глюкозилтрансфераз Streptococcus mutans и роль их генных продуктов в сахарозозависимой клеточной адгезии

    .

    Microb Pathog

    20

    :

    225

    233

    .

    (

    1998

    )

    Молекулярный анализ генов глюкозилтрансфераз среди штаммов Streptococcus mutans

    .

    Infect Immun

    161

    :

    331

    336

    .

    (

    2002

    )

    Дифференциальный и количественный анализ экспрессии мРНК глюкозилтрансфераз из Streptococcus mutans MT8148

    .

    J Dent Res

    81

    :

    109

    113

    .

    (

    1992

    )

    Экспрессия генов Streptococcus mutans gtf в Streptococcus milleri

    .

    Infect Immun

    60

    :

    2815

    2822

    .

    (

    2003

    )

    Новый спектрофлуориметрический микроанализ на приверженность Streptococcus mutans к гидроксилапатиту

    .

    J Microbiol Methods

    54

    :

    315

    323

    .

    (

    2005

    )

    Антибактериальный антисмысловой

    .

    Curr Opin Mol The

    7

    :

    109

    113

    .

    (

    1980

    )

    Биология, иммунология и кариесогенность Streptococcus mutans

    .

    Microbiol Ред.

    44

    :

    331

    384

    .

    (

    2000

    )

    Лечение Mycobacterium tuberculosis антисмысловыми олигонуклеотидами к мРНК глутаминсинтетазы ингибирует активность глутаминсинтетазы, образование структуры клеточной стенки поли-1-глутаматеглютамина и репликацию бактерий

    .

    Proc Natl Acad Sci USA

    97

    :

    418

    423

    .

    (

    1998

    )

    Инактивация гена gbpA у Streptococcus mutans увеличивает вирулентность и способствует накоплению in vivo рекомбинаций между генами глюкозилтрансфераз B и C

    .

    Infect Immun

    66

    :

    2180

    2185

    .

    (

    2002

    )

    Экспрессия глюкозилтрансферазы стрептококка в виде слияния со связывающим растворенное вещество белком в Lactobacillus fermentum BR11

    .

    FEMS Microbiol Lett

    211

    :

    71

    75

    .

    (

    2001

    )

    Естественная генетическая трансформация Streptococcus mutans , растущего в биопленках

    .

    Дж Бактериол

    183

    :

    897

    908

    .

    (

    2002

    )

    Новая двухкомпонентная регуляторная система, участвующая в формировании биопленок и кислотной устойчивости у Streptococcus mutans

    .

    Дж Бактериол

    184

    :

    6333

    6342

    .

    (

    2000

    )

    Формирование биопленок Streptococcus gordonii : идентификация генов, кодирующих фенотипы биопленок

    .

    Дж Бактериол

    182

    :

    1374

    1382

    .

    (

    1985

    )

    Повышенная секреция глюкозилтрансферазы за счет изменений концентрации ионов калия сопровождается изменением структуры мембранных жирных кислот у Streptococcus salivarius

    .

    Дж Бактериол

    161

    :

    989

    994

    .

    (

    1999

    )

    Глюкансахаразы: механизм действия и взаимосвязи архитектура-функция

    .

    FEMS Microbiol Ред.

    23

    :

    131

    151

    .

    (

    1991

    )

    Кариесогенность Streptococcus mutans V403 мутанты глюкозилтрансферазы и фруктозилтрансферазы, сконструированные путем аллельного обмена

    .

    Infect Immun

    59

    :

    2316

    2323

    .

    (

    1983

    )

    Генетическая трансформация предполагаемых кариесогенных свойств у Streptococcus mutans

    .

    Infect Immun

    41

    :

    722

    727

    .

    (

    2004

    )

    Дальнейшая характеристика иммуномодуляции моноклональным антителом против Streptococcus mutans Antigen P1

    .

    Infect Immun

    72

    :

    13

    21

    .

    (

    1993

    )

    Создание модельной системы секреции для оральных Streptococci

    .

    Infect Immun

    61

    :

    3745

    3755

    .

    (

    2003

    )

    Иммуногенность и защитный иммунитет, индуцированный синтетическими пептидами, связанными с предполагаемыми иммунодоминантными областями Streptococcus mutans глюкан-связывающего белка B

    .

    Infect Immun

    71

    :

    1179

    1184

    .

    (

    2005

    )

    Антисмысловые стратегии инактивации онкогенов

    .

    Семин Онкол

    32

    :

    563

    572

    .

    (

    2005

    )

    Антисмысловой олигомер пептидной нуклеиновой кислоты как терапевтическая стратегия против бактериальной инфекции: доказательство принципа с использованием внутрибрюшинной инфекции у мышей

    .

    Антимикробные агенты Chemother

    49

    :

    3203

    3207

    .

    (

    2006

    )

    Влияние дефицита Streptococcus mutans gtfC на смешанные биопленки полости рта in vitro

    .

    Кариес Res

    40

    :

    163

    171

    .

    (

    2003

    )

    Оценка использования стратегии антисмысловой РНК для идентификации основных генов у гетерологичных бактерий

    .

    FEMS Microbiol Lett

    220

    :

    171

    176

    .

    (

    2005

    )

    Индуцируемая экспрессия антисмысловой РНК в характеристике функции генов у Streptococcus mutans

    .

    Infect Immun

    73

    :

    3568

    3576

    .

    (

    1993

    )

    Роль генов S treptococcus mutans gtf в индукции кариеса у крыс модели

    , свободной от специфических патогенов.

    Infect Immun

    61

    :

    3811

    3817

    .

    (

    2004

    )

    Рациональная конструкция пептида против кариеса против Streptococcus mutans

    .

    Молекулярное разнообразие

    8

    :

    121

    126

    .

    Заметки автора

    © Федерация европейских микробиологических обществ, 2006 г. Опубликовано Blackwell Publishing Ltd.Все права защищены

    Группы Концентрация нерастворимых в воде глюканов (мкг / мл)
    PS-ODN1 424,4 ± 14,0
    PS-ODN3 892,6 ± 15,06
    So-Fast ™ 1027,5 ± 10,5
    Control 1011,3 ± 7,8
    1011,3 ± 7,8

    Закон об иммиграции и гражданстве | USCIS

    INA 201

    8 U.S.C. 1151

    Мировой уровень иммиграции.

    INA 202

    8 U.S.C. 1152

    Числовые ограничения для отдельных иностранных государств.

    INA 203

    8 Ед.S.C. 1153

    Выдача иммиграционных виз.

    INA 204

    8 U.S.C. 1154

    Порядок предоставления статуса иммигранта.

    INA 205

    8 U.S.C. 1155

    Отмена одобрения ходатайств; Дата вступления в силу.

    INA 206

    8 Ед.S.C. 1156

    Неиспользованные иммиграционные визы.

    INA 207

    8 U.S.C. 1157

    Ежегодный прием беженцев и прием беженцев в чрезвычайных ситуациях.

    INA 208

    8 U.S.C. 1158

    Убежище.

    INA 209

    8 Ед.С.С. 1159

    Корректировка статуса беженцев.

    INA 210

    8 U.S.C. 1160

    Специальные сельскохозяйственные рабочие.

    INA 210A

    8 U.S.C. 1161

    признана недействительной.

    INA 211

    8 Ед.S.C. 1181

    Прием иммигрантов в США.

    INA 212

    8 U.S.C. 1182

    Иностранцы, недопустимые для проживания.

    INA 213

    8 U.S.C. 1183

    Допуск иностранцев под залог или обязательство; вернуться при постоянном выезде.

    INA 213A

    8 U.S.C. 1183a

    Требования к письменным показаниям спонсора о поддержке.

    INA 214

    8 U.S.C. 1184

    Прием неиммигрантов.

    INA 215

    8 U.S.C. 1185

    Контроль поездок граждан и иностранцев.

    INA 216

    8 U.S.C. 1186a

    Статус условного постоянного жителя для некоторых супругов, сыновей и дочерей иностранцев.

    INA 216A

    8 U.S.C. 1186b

    Статус условного постоянного жителя для некоторых иностранных предпринимателей, супругов и детей.

    INA 217

    8 Ед.S.C. 1187

    Программа безвизового въезда для определенных посетителей.

    INA 218

    8 U.S.C. 1188

    Прием временных работников H – 2A.

    INA 219

    8 U.S.C. 1189

    Наименование иностранных террористических организаций.

    INA 221

    8 Ед.С.С. 1201

    Выдача виз.

    INA 222

    8 U.S.C. 1202

    Заявление на получение визы.

    INA 223

    8 U.S.C. 1203

    Разрешение на повторный въезд.

    INA 224

    8 Ед.С.С. 1204

    Визы для близких родственников и специальные иммиграционные визы.

    INA 231

    8 U.S.C. 1221

    Списки прибывающих и отбывающих пассажиров иностранцев и граждан.

    INA 232

    8 U.S.C. 1222

    Задержание иностранцев для медицинского и психологического обследования.

    INA 233

    8 U.S.C. 1223

    Въезд через иностранную территорию и прилегающие острова или с них.

    INA 234

    8 U. S.C. 1224

    Обозначение пунктов въезда иностранцев, прибывающих воздушным путем.

    INA 235

    8 Ед.S.C. 1225

    Проверка иммиграционной службой; ускоренное удаление недопустимо прибывающих иностранцев; направление на слушание.

    INA 235A

    8 U.S.C. 1225a

    Прединспекция в зарубежных аэропортах.

    INA 236

    8 U.S.C. 1226

    Задержание и задержание иностранцев.

    INA 236A

    8 U.S.C. 1226a

    Обязательное задержание подозреваемых в терроризме; хабеас корпус; судебный надзор.

    INA 237

    8 U.S.C. 1227

    Депортируемые пришельцы.

    INA 238

    8 Ед.S.C. 1228

    Ускоренное удаление иностранцев, осужденных за совершение тяжких преступлений.

    INA 239

    8 U.S.C. 1229

    Возбуждение дела о высылке.

    INA 240

    8 U.S.C. 1229a

    Процедура удаления.

    INA 240A

    8 Ед.S.C. 1229b

    Отмена удаления; регулировка статуса.

    INA 240B

    8 U.S.C. 1229c

    Добровольный выезд.

    INA 240C

    8 U.S.C. 1230

    Записи о приеме.

    INA 241

    8 Ед.S.C. 1231

    Задержание и удаление иностранцев приказано удалено.

    INA 242

    8 U.S.C. 1252

    Судебное рассмотрение постановлений о высылке.

    INA 242A

    8 U.S.C. 1252a

    Передано.

    INA 242B

    8 Ед. S.C. 1252b

    признана недействительной.

    INA 243

    8 U.S.C. 1253

    Штрафы, связанные с удалением.

    INA 244

    8 U.S.C. 1254a

    Статус временной защиты.

    INA 245

    8 Ед.S.C. 1255

    Изменение статуса неиммигранта на статус лица, допущенного на постоянное место жительства.

    INA 245A

    8 U.S.C. 1255a

    Изменение статуса некоторых абитуриентов до 1 января 1982 года до статуса лиц, допущенных к законному проживанию.

    INA 246

    8 Ед.S.C. 1256

    Отмена корректировки статуса; влияние на натурализованного гражданина.

    INA 247

    8 U.S.C. 1257

    Приведение статуса некоторых иностранцев-резидентов к неиммиграционным; исключения.

    INA 248

    8 U.S.C. 1258

    Изменение неиммиграционной классификации.

    INA 249

    8 U.S.C. 1259

    Запись о допуске на постоянное жительство для некоторых иностранцев, которые въехали в Соединенные Штаты до 1 января 1972 года.

    INA 250

    8 U.S.C. 1260

    Удаление пришельцев, терпящих бедствие.

    INA 251

    8 Ед.S.C. 1281

    Чужие члены экипажа.

    INA 252

    8 U.S.C. 1282

    Условные разрешения на временную посадку.

    INA 253

    8 U.S.C. 1283

    Госпитальное лечение членов экипажа пришельцев, страдающих определенными заболеваниями.

    INA 254

    8 Ед.S.C. 1284

    Контроль над чужими членами экипажа.

    INA 255

    8 U.S.C. 1285

    Работа на пассажирских судах иностранцев с ограниченными возможностями.

    INA 256

    8 U.S.C. 1286

    Вывоз инопланетных членов экипажа; штрафы.

    INA 257

    8 Ед.S.C. 1287

    иностранных членов экипажа, доставленных в Соединенные Штаты с намерением уклониться от иммиграционных законов; штрафы.

    INA 258

    8 U.S.C. 1288

    Ограничения на выполнение портовых работ иностранными бригадирами.

    INA 261

    8 U.S.C. 1301

    Иностранец, ищущий доступ; содержание.

    INA 262

    8 U.S.C. 1302

    Регистрация иностранцев.

    INA 263

    8 U.S.C. 1303

    Регистрация особых групп.

    INA 264

    8 U.S.C. 1304

    Бланки для регистрации и снятия отпечатков пальцев.

    INA 265

    8 U.S.C. 1305

    Уведомления об изменении адреса.

    INA 266

    8 U.S.C. 1306

    Штрафы.

    INA 271

    8 U.S.C. 1321

    Предупреждение несанкционированной посадки инопланетян.

    INA 272

    8 U.S.C. 1322

    Ввоз иностранца, которому отказано во въезде по состоянию здоровья; ответственные лица; документы о разрешении; исключения; определение «лицо».

    INA 273

    8 U.S.C. 1323

    Незаконный ввоз иностранцев в США.

    INA 274

    8 Ед.С.С. 1324

    Привоз и укрывательство некоторых пришельцев.

    INA 274A

    8 U.S.C. 1324a

    Незаконное трудоустройство иностранцев.

    INA 274B

    8 U.S.C. 1324b

    Недобросовестная практика приема на работу, связанная с иммиграцией.

    INA 274C

    8 Ед.S.C. 1324c

    Штрафы за подделку документов.

    INA 274D

    8 U.S.C. 1324d

    Гражданские штрафы за не выезд.

    INA 275

    8 U.S.C. 1325

    Неправильный въезд иностранца.

    INA 276

    8 Ед.С.С. 1326

    Возвращение удаленных пришельцев.

    INA 277

    8 U.S.C. 1327

    Помощь или содействие определенным инопланетянам войти.

    INA 278

    8 U. S.C. 1328

    Ввоз иностранца с аморальными целями.

    INA 279

    8 Ед.С.С. 1329

    Юрисдикция районных судов.

    INA 280

    8 U.S.C. 1330

    Взыскание пеней и расходов.

    INA 281

    8 U.S.C. 1351

    Сборы за неиммиграционную визу.

    INA 282

    8 Ед.С.С. 1352

    Печать разрешений на вход и бланков манифеста и списков экипажа; продажа населению.

    INA 283

    8 U.S.C. 1353

    Путевые расходы и расходы на транспортировку останков офицеров и служащих, погибших за пределами США.

    INA 284

    8 Ед.С.С. 1354

    Применимо к военнослужащим.

    INA 285

    8 U.S.C. 1355

    Распоряжение льготами на иммигрантских станциях; аренда; розничная продажа; размещение квитанций.

    INA 286

    8 U.S.C. 1356

    Распоряжение денежными средствами, полученными в соответствии с положениями настоящего подраздела.

    INA 287

    8 U.S.C. 1357

    Полномочия иммиграционных служащих и сотрудников.

    INA 288

    8 U.S.C. 1358

    Местная юрисдикция над станциями для иммигрантов.

    INA 289

    8 U.S.C.1359

    Заявление для американских индейцев, родившихся в Канаде.

    INA 290

    8 U.S.C. 1360

    Создание центрального архива; информация из других ведомств и агентств.

    INA 291

    8 U.S.C. 1361

    Бремя доказывания на иностранца.

    INA 292

    8 U.S.C. 1362

    Право на адвоката.

    INA 293

    8 U.S.C. 1363

    Депозит и проценты по денежным средствам, полученным для обеспечения иммиграционных облигаций.

    INA 294

    8 U.S.C. 1363a

    Агентство тайных расследований.

    INA 295

    8 U.S.C. 1363b

    признана недействительной.

    Границы морских наук

    Frontiers in Marine Science публикует тщательно отрецензированные исследования, которые расширяют наше понимание всех аспектов окружающей среды, биологии, функционирования экосистем и взаимодействия человека с океанами.Главный редактор Карлос М. Дуарте из Университета науки и технологий имени короля Абдаллы Тувал пользуется поддержкой выдающегося редакционного совета международных исследователей. Этот междисциплинарный журнал с открытым доступом находится на переднем крае распространения научных знаний и важных открытий среди исследователей, ученых, политиков и общественности во всем мире.

    Поскольку прогнозируется, что к 2050 году человеческое население достигнет 9 миллиардов человек, очевидно, что традиционных земельных ресурсов будет недостаточно для удовлетворения спроса на продукты питания или энергию, необходимые для обеспечения высококачественных средств к существованию.В результате океаны превращаются в источник неиспользованных активов, а новые инновационные отрасли, такие как аквакультура, морская биотехнология, морская энергия и глубоководная добыча полезных ископаемых, быстро растут в новую эру, характеризуемую быстрым ростом голубого океана. основанная экономика. Устойчивость «голубой экономики» во многом зависит от наших знаний о том, как смягчить воздействие множественного давления на экосистему океана, связанного с увеличением масштабов и диверсификацией промышленных операций в океане и глобальным антропогенным давлением на окружающую среду.Таким образом, Frontiers in Marine Science особенно приветствует сообщение результатов исследований, направленных на решение возникающих проблем на основе океана, включая улучшение возможностей прогнозирования и наблюдений, понимание проблем биоразнообразия и экосистем на местном и глобальном уровнях, эффективные стратегии управления для поддержания здоровья океана, и улучшенный потенциал для устойчивого извлечения ресурсов из океанов.

    С этой целью в журнале разработан ряд специальностей, которые четко очерчивают эти направления исследований.В конечном итоге журнал стремится ускорить прогресс, приветствуя новые идеи и подходы, которые могут изменить парадигмы в нашем понимании и взаимодействии с океанами. Темы исследований Frontiers особенно подходят для ознакомления с новыми разработками и направлениями в морских науках (www.frontiersin.org/about/RTGuidelines). Frontiers in Marine Science будет использовать уникальную платформу Frontiers для публикаций с открытым доступом и исследовательских сетей для ученых, которая предоставляет равные возможности для поиска, обмена и создания знаний.Миссия Frontiers — вернуть публикацию в руки работающих ученых и продвигать интерактивный, справедливый и эффективный процесс рецензирования. Статьи рецензируются в соответствии с руководящими принципами Frontiers Review, которые оценивают рукописи по объективным редакционным критериям.


    Frontiers in Marine Science является членом Комитета по этике публикаций.

    Рекомендации по сжатию видео и аудио — Справочный центр Vimeo

    Кодеки

    Кодек — это формат, в котором кодируется ваше видео.Мы принимаем большинство основных кодеков, но для достижения наилучших результатов мы рекомендуем использовать один из следующих:

    H.264

    H.264 — это стандартный кодек, сочетающий высокое визуальное качество с эффективным размером файла. Это отличная отправная точка для кодирования ваших видео, поскольку она гарантирует, что вы получите максимальную отдачу от своей квоты на загрузку, минимизируя время загрузки и преобразования. Обязательно выберите параметр H.264 «Высокий профиль» вместо «Основной профиль». Обратите внимание, что видеокодек H.264 поддерживает только разрешения до 4K.

    Apple ProRes 422 (HQ)

    Этот кодек профессионального качества обеспечивает высокое качество закодированного видео, но обычно приводит к гораздо большему размеру файла, чем H.264. Если вы заметили проблемы с качеством видео H. 264 и у вас достаточно места для хранения в вашей учетной записи Vimeo, использование ProRes может дать лучший результат.

    H.265 (HEVC)

    H.265 или High Efficiency Video Coding (HEVC) является преемником H.264, который предлагает файл меньшего размера с высоким визуальным качеством за счет увеличения времени кодирования.

    Частота кадров

    При подготовке видео к загрузке лучше всего сохранять исходную частоту кадров видео при сжатии видео. Если ваш отснятый материал превышает 60 кадров в секунду, мы автоматически уменьшаем частоту кадров. Важно: мы рекомендуем постоянную частоту кадров на протяжении всего видео. Всегда выбирайте «постоянную» частоту кадров вместо «переменной».

    Хотя мы принимаем множество значений частоты кадров, наиболее часто используются следующие:

    Скорость передачи данных

    Битрейт (также известный как скорость передачи данных) контролирует визуальное качество видео и размер файла. Если ваше программное обеспечение для редактирования видео предоставляет вам такую ​​возможность, выберите «переменную» скорость передачи данных и выберите значение из диапазонов ниже. Вы можете поэкспериментировать с разными скоростями, если ваш файл слишком велик или вас не устраивает качество исходного файла.

    * Если у вас есть возможность установить CRF (постоянный коэффициент скорости), мы рекомендуем установить его на 18 или ниже. Для ProRes: следуйте стандартным предустановкам в вашем видеоредакторе, чтобы экспортировать файл. Например, ProRes HQ для 1080p при 29,97 кадра в секунду имеет целевую скорость 220 Мбит / с в Final Cut.

    Разрешение

    Видео бывают всех форм и размеров, но это одни из самых распространенных форматов. Мы рекомендуем сжимать видео с соотношением сторон пикселя 1: 1 или квадратными пикселями.

    * Стереоскопическое видео следует загружать так, чтобы левый и правый ракурсы располагались друг над другом как 4096 x 1024 (соотношение сторон 4: 1) для каждого глаза.

    Цвет

    Для наиболее точного отображения цвета на Vimeo мы рекомендуем загрузить файл, содержащий информацию о цветовом пространстве.

    Примечание. Некоторое программное обеспечение может не управлять настройками цвета.

    Основные цвета и матричные коэффициенты

    Мы поддерживаем все основные цвета и матрицы, но мы рекомендуем BT.2020 (Рек. 2020) или BT.709 (Рек. 709). Вы можете использовать одно и то же значение как для основных цветовых коэффициентов, так и для матричных коэффициентов. Для Dolby Vision установите цветовое пространство Rec.2020 HLG.

    Характеристики передачи цвета

    Мы поддерживаем широкий диапазон характеристик передачи для стандартных (SDR) видео, но для HDR-видео мы поддерживаем только функцию передачи PQ (SMPTE 2084) или HLG .При использовании функции передачи PQ (SMPTE 2084) включите следующие метаданные, чтобы обеспечить наиболее точное отображение цветов вашего видео на всех устройствах: Метаданные Mastering Display Color Volume (SMPTE 2086) и Метаданные информации об уровне освещенности контента (CEA 861. 3) . Эти метаданные обычно добавляются автоматически при постобработке.

    Мы также поддерживаем загрузку закодированных файлов Dolby Vision. Dolby Vision для Vimeo использует базовый слой HLG с Rec.2020 основные цвета и динамические метаданные Dolby Vision. При использовании Dolby Vision для Vimeo метаданные автоматически включаются в файл. Для загрузки дополнительных метаданных не требуется. Функция передачи HLG обеспечивает обратную совместимость с рядом устройств, отличных от Dolby Vision, которые поддерживают воспроизведение HLG.

    Битовая глубина

    Мы поддерживаем различную битовую глубину, но мы рекомендуем битовую глубину 10 или больше для достижения наилучшего качества результатов. Для видео с расширенным динамическим диапазоном (HDR) и Dolby Vision ваш файл должен иметь битовую глубину 10 или больше, чтобы он считался HDR на Vimeo.

    Тип развертки:

    Прогрессивная

    Vimeo конвертирует все видео в прогрессивную развертку для воспроизведения. Для достижения наилучших результатов мы рекомендуем деинтерлейсинг видео перед загрузкой.

    Пять вещей о сдерживании | Национальный институт юстиции

    Предотвращает ли наказание преступление? Если да, то как и в какой степени? Сдерживание — эффект предупреждения преступности от угрозы наказания — это теория выбора, в которой люди уравновешивают выгоды и издержки преступления.

    В своем эссе 2013 года «Сдерживание в двадцать первом веке» Дэниел С. Нагин кратко резюмировал текущее состояние теории и эмпирических знаний о сдерживании. [1] Информация в этой публикации взята из эссе Нагина с дополнительным контекстом, предоставленным NIJ, и представлена ​​здесь, чтобы помочь тем, кто разрабатывает политику и законы, основанные на науке. [2]

    «Пять вещей о сдерживании» NIJ суммирует большой объем исследований, связанных с сдерживанием преступности, по пяти пунктам.

    1. Уверенность

    в том, что поймают, является гораздо более мощным сдерживающим фактором, чем наказание.

    Исследования ясно показывают, что шанс быть пойманным — гораздо более эффективное средство устрашения, чем даже драконовское наказание.

    2. Отправка лица, осужденного за преступление, в тюрьму — не очень эффективный способ сдерживания преступности.

    Тюрьмы хороши для наказания преступников и удержания их от улиц, но тюремные сроки (особенно длительные) вряд ли будут сдерживать преступность в будущем.На самом деле тюрьмы могут иметь противоположный эффект: заключенные учатся друг у друга более эффективным стратегиям борьбы с преступностью, а время, проведенное в тюрьме, может снизить чувствительность многих к угрозе тюремного заключения в будущем.

    См. «Понимание взаимосвязи между вынесением приговора и сдерживанием» для дополнительного обсуждения тюрьмы как неэффективного средства устрашения.

    3. Полиция сдерживает преступность, усиливая представление о том, что преступники будут пойманы и наказаны.

    Полиция сдерживает преступление, когда делает что-то, что укрепляет у преступника представление о вероятности того, что его поймают. Особенно эффективны стратегии, использующие полицию в качестве «дозорных», например, патрулирование горячих точек. На поведение преступника с большей вероятностью повлияет встреча с полицейским в наручниках и по радио, чем новый закон, ужесточающий меры наказания.

    4. Ужесточение наказания мало помогает сдерживанию преступления.

    Законы и политика, предназначенные для сдерживания преступности, сосредоточенные главным образом на ужесточении наказания, неэффективны отчасти потому, что преступники мало знают о санкциях за конкретные преступления.

    Более суровые наказания не «наказывают» лиц, осужденных за преступления, а тюрьмы могут усугубить рецидивы преступлений.

    См. «Понимание взаимосвязи между вынесением приговора и сдерживанием» для дополнительного обсуждения тюрьмы как неэффективного средства устрашения.

    5. Нет доказательств того, что смертная казнь отпугивает преступников.

    По данным Национальной академии наук, «Исследования сдерживающего эффекта смертной казни не дают информации о том, увеличивается ли смертная казнь, уменьшается или не влияет на уровень убийств. «


    Понимание взаимосвязи между вынесением приговора и сдерживанием

    В своем эссе 2013 года «Сдерживание в двадцать первом веке» Дэниел С. Нагин кратко резюмировал текущее состояние теории и эмпирических знаний о сдерживании. Информация в этой публикации взята из эссе Нагина с дополнительным контекстом, предоставленным NIJ, и представлена ​​здесь, чтобы помочь тем, кто разрабатывает политику и законы, основанные на науке.

    Сдерживание и ограничение дееспособности

    Существует важное различие между сдерживанием и выведением из строя.Лица, находящиеся за решеткой, не могут совершить дополнительное преступление — это лишение свободы как ограничение дееспособности. Прежде чем кто-то совершит преступление, он или она могут опасаться тюремного заключения и, таким образом, воздерживаться от совершения будущих преступлений — это тюремное заключение как средство устрашения.

    «Пять вещей о сдерживании» NIJ суммирует большой объем исследований, связанных с сдерживанием преступности, по пяти пунктам. Два из пяти факторов относятся к влиянию приговора на сдерживание: «Отправка лица, осужденного за преступление, в тюрьму — не очень эффективный способ сдерживания преступления» и «Повышение суровости наказания мало способствует сдерживанию преступления.«Это простые утверждения, но вопросы наказания и сдерживания намного сложнее. Это приложение к исходным «Пяти вещам» предоставляет дополнительный контекст и доказательства в отношении этих двух утверждений.

    Важно отметить, что, хотя утверждение в оригинальной «Пять вещей» сосредоточено только на влиянии приговора на сдерживание совершения будущих преступлений, тюремное заключение служит двум основным целям: наказанию и лишению дееспособности. Сочетание этих двух целей является стержнем политики вынесения приговоров в Соединенных Штатах, и те, кто наблюдает за вынесением приговоров или участвует в разработке политики вынесения приговоров, всегда должны помнить об этом.

    «Отправка лица, осужденного за преступление, в тюрьму — не очень эффективный способ сдерживания преступления».

    Тюрьма — важный вариант для вывода из строя и наказания тех, кто совершает преступления, но данные показывают, что длительные тюремные сроки мало что делают для удержания людей от совершения преступлений в будущем.

    Если посмотреть на результаты исследований эффектов тяжести в их совокупности, есть данные, свидетельствующие о том, что короткие приговоры могут быть сдерживающим фактором. Однако постоянный вывод состоит в том, что увеличение и без того длинных приговоров дает в лучшем случае очень умеренный сдерживающий эффект.

    Очень небольшая часть лиц, совершающих преступления — от 2 до 5 процентов — несут ответственность за 50 или более процентов преступлений. [3] Заключение этих людей в тюрьму, когда они молоды и в начале своей криминальной карьеры, могло бы стать эффективной стратегией предотвращения преступности, если бы мы могли определить, кто они. Проблема в том, что мы не можем. Мы пытались определить молодых людей, которые с наибольшей вероятностью совершат преступления в будущем, но наука показывает, что мы не можем сделать это эффективно.

    Важно понимать, что многие из этих людей, которые совершают правонарушения с более высокой частотой, могут уже быть заключены в тюрьму, потому что они подвергают себя риску задержания гораздо чаще, чем люди, которые совершают правонарушения с более низкой частотой.

    «Ужесточение наказания мало помогает сдерживанию преступления».

    Чтобы прояснить взаимосвязь между строгостью наказания и сдерживанием будущих преступлений, вам необходимо понять:

    • Отсутствие «карающего» эффекта от тюремного заключения,
    • Тюрьмы могут способствовать обострению рецидивов,
    • Различное влияние уверенности в зависимости от строгости наказания на сдерживание, и
    • С возрастом люди перестают заниматься преступной деятельностью.
    Более суровые наказания не «наказывают» лиц, виновных в совершении преступлений.

    Некоторые политики и практики считают, что усиление суровости тюремного заключения усиливает «наказывающий» эффект, тем самым снижая вероятность совершения преступлений в будущем лицами, осужденными за правонарушение. Фактически, ученые не нашли доказательств эффекта наказания. Тюрьмы могут усугубить рецидивизм. Исследования показали, что тюрьма может усугубить, а не уменьшить рецидив.Сами тюрьмы могут быть школами для обучения совершению преступлений. В 2009 году Нагин, Каллен и Джонсон опубликовали обзор данных о влиянии тюремного заключения на рецидивы преступлений [4]. Обзор включал значительное количество исследований, включая данные за пределами США. Исследователи пришли к выводу:

    «… по сравнению с санкциями, не связанными с лишением свободы, лишение свободы имеет нулевое или умеренно криминогенное воздействие на будущую причастность к преступлению. Мы предупреждаем, что эта оценка не является достаточно твердой, чтобы руководствоваться политикой, за исключением того, что она ставит под сомнение дикие утверждения о том, что тюремное заключение имеет сильный специфический сдерживающий эффект.”
    Уверенность оказывает большее влияние на сдерживание, чем строгость наказания.

    Уровень серьезности относится к длине предложения. Исследования показывают, что для большинства лиц, осужденных за преступление, короткие или умеренные тюремные сроки могут быть сдерживающим фактором, но более длительные тюремные сроки имеют лишь ограниченный сдерживающий эффект. Кроме того, выгода от предотвращения преступности намного меньше социальных и экономических затрат.

    Уверенность относится к вероятности быть пойманным и наказанным за совершение преступления.Исследования подчеркивают более важную роль, которую играет уверенность в сдерживании, чем суровость: уверенность в том, что человека поймают, удерживает человека от совершения преступления, а не страх перед наказанием или суровость наказания. Эффективная работа полиции, ведущая к быстрым и определенным (но не обязательно суровым) санкциям, является лучшим сдерживающим фактором, чем угроза лишения свободы. Кроме того, нет никаких доказательств того, что сдерживающий эффект усиливается с увеличением вероятности осуждения.Также нет никаких доказательств того, что сдерживающий эффект усиливается с увеличением вероятности тюремного заключения.

    Возраст человека — мощный фактор сдерживания преступности.

    Даже те люди, которые совершают самые высокие преступления, с возрастом начинают менять свое преступное поведение. Данные показывают резкое снижение примерно к 35 годам [5]. Более суровое (т. Е. Длительное) тюремное заключение для осужденных, которые естественным образом стареют после совершения преступления, действительно способствует достижению цели наказания и ограничения дееспособности.Но это недееспособность — дорогостоящий способ сдерживания будущих преступлений со стороны стареющих людей, которые уже менее склонны к совершению этих преступлений в силу возраста.

    Психическое здоровье и употребление психоактивных веществ

    Основные факты

    • Работа полезна для психического здоровья, но неблагоприятная рабочая среда может привести к проблемам с физическим и психическим здоровьем.
    • Депрессия и тревога оказывают значительное влияние на экономику; По оценкам, глобальная экономика обойдется в потерю производительности в 1 триллион долларов США в год.
    • Оскорбления и издевательства на работе — это обычно проблемы, о которых сообщают, и они могут иметь существенное неблагоприятное воздействие на психическое здоровье.
    • Есть много эффективных действий, которые организации могут предпринять для укрепления психического здоровья на рабочем месте; такие действия также могут повысить производительность.
    • На каждый 1 доллар США, вложенный в расширенное лечение распространенных психических расстройств, возвращается 4 доллара США в виде улучшения здоровья и производительности.

    Обзор

    По оценкам, 264 миллиона человек во всем мире страдают от депрессии, одной из основных причин инвалидности, причем многие из этих людей также страдают симптомами тревоги.По оценкам недавнего исследования, проведенного ВОЗ, депрессия и тревожные расстройства ежегодно обходятся мировой экономике в 1 триллион долларов США в виде потери производительности. Безработица является общепризнанным фактором риска проблем с психическим здоровьем, а возвращение на работу или получение работы является защитным фактором. Негативная рабочая среда может привести к проблемам с физическим и психическим здоровьем, вредному употреблению психоактивных веществ или алкоголя, прогулам и снижению производительности. Рабочие места, которые способствуют укреплению психического здоровья и поддерживают людей с психическими расстройствами, с большей вероятностью сократят количество прогулов, увеличат производительность и извлекут выгоду из связанных с этим экономических выгод.

    Этот информационный лист касается психического здоровья и расстройств на рабочем месте. Он также охватывает трудности, которые не являются психическими расстройствами, но которые могут быть созданы или усугублены работой, например, стрессом и выгоранием.

    Факторы риска для здоровья, связанные с работой

    Существует множество факторов риска для психического здоровья, которые могут присутствовать в производственной среде. Большинство рисков связано с взаимодействием между типом работы, организационной и управленческой средой, навыками и компетенциями сотрудников и поддержкой, доступной сотрудникам для выполнения их работы.Например, человек может обладать навыками для выполнения задач, но у него может быть слишком мало ресурсов для выполнения того, что требуется, или может существовать неподдерживающая управленческая или организационная практика.

    Риски для психического здоровья включают:

    • ненадлежащую политику в области здоровья и безопасности;
    • плохая практика общения и управления;
    • ограниченное участие в принятии решений или низкий контроль над своей сферой работы;
    • низкий уровень поддержки сотрудников;
    • негибкий график работы; и
    • нечеткие задачи или организационные цели.

    Риски также могут быть связаны с содержанием работы, например, задачи, не соответствующие компетенции человека, или высокая и непрекращающаяся рабочая нагрузка. Некоторые рабочие места могут нести более высокий личный риск, чем другие (например, сотрудники службы экстренного реагирования и гуманитарные работники), что может повлиять на психическое здоровье и быть причиной симптомов психических расстройств или привести к вредному употреблению алкоголя или психоактивных препаратов. Риск может возрасти в ситуациях, когда отсутствует сплоченность команды или социальная поддержка.

    Запугивание и психологическое преследование (также известное как «моббинг») обычно являются причинами рабочего стресса у работников и представляют опасность для здоровья работников.Они связаны как с психологическими, так и с физическими проблемами. Эти последствия для здоровья могут иметь издержки для работодателей с точки зрения снижения производительности и увеличения текучести кадров. Они также могут иметь негативное влияние на семейные и социальные взаимоотношения.

    Создание здорового рабочего места

    Важным элементом достижения здорового рабочего места является разработка государственного законодательства, стратегий и политики, как подчеркивается в работе Европейского Союза Компас в этой области.Здоровое рабочее место можно охарактеризовать как место, где рабочие и руководители активно вносят свой вклад в создание рабочей среды, способствуя защите здоровья, безопасности и благополучия всех сотрудников. В научном отчете от 2014 года говорится, что вмешательства должны основываться на трехстороннем подходе:

    • Защита психического здоровья за счет снижения факторов риска, связанных с работой.
    • Содействовать психическому здоровью, развивая положительные стороны работы и сильные стороны сотрудников.
    • Решайте проблемы психического здоровья независимо от их причины.

    Основываясь на этом, руководство Всемирного экономического форума выделяет шаги, которые организации могут предпринять для создания здорового рабочего места, в том числе:

    • Осведомленность об окружающей среде на рабочем месте и о том, как ее можно адаптировать для улучшения психического здоровья различных сотрудников.
    • Изучение мотивации руководителей организаций и сотрудников, которые предприняли действия.
    • Не изобретать колеса, зная, что сделали другие компании, которые приняли меры.
    • Понимание возможностей и потребностей отдельных сотрудников в разработке более эффективных политик в области психического здоровья на рабочем месте.
    • Осведомленность об источниках поддержки и о том, где люди могут найти помощь.

    Вмешательства и передовые методы, которые защищают и укрепляют психическое здоровье на рабочем месте, включают:

    • внедрение и обеспечение соблюдения политик и практик в области охраны здоровья и безопасности, включая выявление стресса, вредного употребления психоактивных веществ и заболеваний и предоставление ресурсов для борьбы с ними. ;
    • информирование персонала о наличии поддержки;
    • вовлечение сотрудников в процесс принятия решений, передача чувства контроля и участия; организационные методы, поддерживающие здоровый баланс между работой и личной жизнью;
    • программы карьерного роста сотрудников; и
    • признание и вознаграждение за вклад сотрудников.

    Вмешательства в области психического здоровья должны осуществляться как часть комплексной стратегии здоровья и благополучия, которая включает профилактику, раннее выявление, поддержку и реабилитацию. Службы гигиены труда или специалисты могут поддерживать организации в реализации этих вмешательств там, где они доступны, но даже если они не доступны, можно внести ряд изменений, которые могут защитить и укрепить психическое здоровье. Ключом к успеху является вовлечение заинтересованных сторон и персонала на всех уровнях при обеспечении мер защиты, продвижения и поддержки, а также при мониторинге их эффективности.

    Доступные исследования затрат и выгод по стратегиям решения проблем психического здоровья указывают на чистую выгоду. Например, недавнее исследование, проведенное под руководством ВОЗ, показало, что на каждый 1 доллар США, вложенный в расширенное лечение распространенных психических расстройств, возвращается 4 доллара США в виде улучшения здоровья и производительности.

    Поддержка людей с психическими расстройствами на работе

    Организации несут ответственность за поддержку людей с психическими расстройствами в их продолжении или возвращении на работу. Исследования показывают, что безработица, особенно длительная безработица, может пагубно сказаться на психическом здоровье.Многие из перечисленных выше инициатив могут помочь людям с психическими расстройствами. В частности, гибкий график, изменение структуры работы, устранение негативной динамики на рабочем месте, а также поддерживающее и конфиденциальное общение с руководством могут помочь людям с психическими расстройствами продолжить работу или вернуться к ней. Доказано, что доступ к лечению, основанному на доказательствах, полезен при депрессии и других психических расстройствах. Из-за стигмы, связанной с психическими расстройствами, работодатели должны обеспечить, чтобы люди чувствовали поддержку и могли просить о поддержке, чтобы продолжить работу или вернуться к ней, и чтобы им были предоставлены необходимые ресурсы для выполнения своей работы.

    Статья 27 Конвенции ООН о правах инвалидов (КПИ) обеспечивает юридически обязательную глобальную основу для продвижения прав людей с ограниченными возможностями (включая психосоциальные нарушения). Он признает, что каждый человек с ограниченными возможностями имеет право на работу, с ним следует обращаться одинаково и без дискриминации, а также следует обеспечивать поддержку на рабочем месте.

    Ответные меры ВОЗ

    На уровне глобальной политики Глобальный план действий ВОЗ по охране здоровья работников (2008-2017 гг.) И План действий в области психического здоровья (2013-2030 гг.) Излагают соответствующие принципы, цели и стратегии реализации, направленные на укрепление психического здоровья в рабочее место.К ним относятся: рассмотрение социальных детерминант психического здоровья, таких как уровень жизни и условия труда; мероприятия по профилактике и укреплению здоровья и психического здоровья, включая мероприятия по снижению стигматизации и дискриминации; и расширение доступа к основанной на фактических данных медицинской помощи за счет развития служб здравоохранения, включая доступ к службам гигиены труда.

    Похожие записи

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *