|
| ||||
|
| ||||
| |||||
| |||||
|
| ||||
| |||||
|
| ||||
| |||||
|
| ||||
|
| ||||
| |||||
|
09.2021
09.2021
местами по Нижегородской области сохранится чрезвычайная (5 класс) пожароопасность лесов и торфяников.
Приглашаем вас!
09.2021Адвокат в Москве при ДТП ст. 264 УК РФ
СТ. 264 УК РФ – Нарушение правил дорожного движения и эксплуатации транспортных средств
Автомобиль это источник повышенной опасности, управление им накладывает на водителя высокую ответственность за жизнь и здоровье других участников дорожного движения.
Нарушение водителем правил дорожного движения или эксплуатации ТС, повлекшее по неосторожности причинение тяжкого вреда здоровью человека, влечет уголовную ответственность по ч.1 ст. 264 УК РФ, наказывается лишением свободы до 2 лет.
В случае если водитель, виновный в ДТП находился в состоянии алкогольного или наркотического опьянения, то его действия должны быть квалифицированы по ч. 2 ст. 264 УК РФ. Наказывается лишением свободы, сроком до 3 лет.
Если же по вине водителя пострадавший получил травмы, несовместимые с жизнью, то это деяние квалифицируется по ч.
Если в результате виновных действий водителя, находящегося в состоянии опьянения погиб человек, действия водителя квалифицируются по ч. 4 ст. 264 УК РФ, наказываются лишением свободы на срок до 7 лет. А в случае гибели двух и более человек от виновных действий «пьяного» водителя, срок наказания предусмотрен от 4 до 9 лет лишения свободы.
Деяние, предусмотренное ст. 264 УК РФ считается преступлением, совершенным по неосторожности. Но судебная практика достаточно жесткая по данной категории преступлений и без помощи опытного адвоката по уголовным делам Вам не обойтись. Самое идеальное время для обращения к адвокату, это первые час после ДТП. Сотрудники ДПС, приехав на место совершения наезда на пешехода или на место стокновения двух и более автомобилей, в результате которого пострадали люди, начнут проводить действия, направленные на фиксацию события, составления схемы ДТП, протоколов, возьмут с участников ДТП и свидетелей объяснения по факту произошедшего.
Лучше, что бы уже с Вами был грамотный защитник, который поможет Вам в стрессовой ситуации не наговорить и не наделать глупостей, способных негативно сказаться на Вашей дальнейшей судьбе.
Важно знать! Если в результате ДТП был причинен вред здоровью потерпевшему, уголовное дело могут возбудить лишь после получения результатов мед. экспертизы, где будет установлен тяжкий вред здоровью. В случае, если вред будет оценен экспертами как средней тяжести или легкий, то оснований для возбуждения уголовного дела по ст. 264 УК РФ у следствия не будет.
Положительного результата всегда можно добиться при условии своевременного обращения за помощью. Не теряйте времени! Звоните по тел: 8 (968) 522-81-03
Адвокат по уголовным делам в Москве Ринат Бичурин.
С уважением, адвокат Бичурин Р.Ж.
Статья 264. Нарушение правил дорожного движения и эксплуатации транспортных средств.
Нарушение водителем Правил дорожного движения, которое привело по неосторожности причинение тяжкого вреда здоровью потерпевшему влечет наказание до 2-х лет лишения свободы.
- Вышеуказанные действия, повлекшие тяжкий вред здоровью потерпевшего:
- а) Водитель находился в состоянии алкогольного опьянения;
- б) Водитель оставил место совершения преступления,- наказываются лишением свободы от 3-х до 7 лет.
Указанные в ч. 1 действия, повлекшие по неосторожности смерть потерпевшего, влекут наказание до 5 лет лишение свободы с лишением права занимать определенные должности или заниматься деятельностью на срок до 3-х лет.
- Нарушение Правил дорожного движения, что повлекло по неосторожности смерть потерпевшего:
- а) Водитель находился в состоянии алкогольного опьянения;
- б) Водитель оставил место совершения преступления,- наказываются лишением свободы от 5 до 12 лет, с лишением права занимать определенные должности или заниматься деятельностью на срок до 3-х лет.
Действия, указанные в части 1, причинившие по неосторожности смерть двум или более потерпевшим влекут лишение свободы до 7 лет, с лишением права занимать определенные должности или заниматься деятельностью на срок до 3-х лет. Может быть применено альтернативное наказание — принудительные работы.
- Действия, указанные в части 1, причинившие по неосторожности смерть двум или более потерпевшим влекут лишение свободы до 7 лет, совершенные лицом:
- а) в состоянии опьянения;
- б) с оставлением места преступления, — наказываются лишением свободы от 8 до 15 лет, с лишением права занимать определенные должности или заниматься деятельностью на срок до 3-х лет.
Могут быть применены альтернативные виды наказаний; принудительные работы; дополнительное наказание к лишению свободы; лишение права занимать определенные должности.
Примечание. Лицо, управлявшее транспортным средством, будет признано находившимся в состоянии опьянения при установлении факта употребления им веществ, вызывающих алкогольное или наркотическое опьянение, либо если оно отказалось от прохождения медицинского освидетельствования на состояние опьянения.
Комментарии к Cтатье 264 УК РФ
Под данное определение подходят автомобили, трамваи, автобусы, троллейбусы, а также любые самоходные устройства, приводимые в движение двигателем. Если же эксплуатация транспортного средства осуществляется при помощи толкания, то объект преступления в данном случае отсутствует.
К нарушениям правил безопасного движения можно отнести проезд транспортного средства на красный свет светофора, превышение скорости …
К нарушениям правил использования ТС может относиться нахождение транспорта в месте, не предназначенном для парковки, эксплуатация ТС с наличием неисправностей или же транспортировка людей в плохо оборудованном транспорте.
Главный фактор преступного деяния в данном случае – это ухудшение здоровья потерпевшего вследствие данного деяния или летальный исход одного или нескольких человек.
Для возможности применения статьи 264 УК преступное деяние, совершённое механическим транспортом, должно иметь место в пределах дорог.
Преступление считается совершённым при наличии опасных последствий. Если же подобные последствия отсутствуют, то преступление может рассматриваться по положениям гл. 12 КоАП РФ.
Субъектом преступления считается человек в возрасте от шестнадцати лет, который управляет ТС или же несёт ответственность за его использование. При этом не важно, имеет данное лицо водительские права или нет.
Наличие у лица, управляющего ТС, алкогольного или наркотического опьянения должно быть освидетельствовано в медицинских условиях согласно Постановлению от 9 декабря 2008 года.
Лицо, находящееся за рулём ТС, не указанного в перечне к данной статье, (например, велосипеда) и повлёкшее своими действиями причинение вреда здоровью потерпевшего, несёт ответственность по ст.
Если же в ходе следствия устанавливается, что лицо, управлявшее ТС, нанесло умышленный вред здоровью, повлёкший за собой тяжкие последствия или смерть, то данное деяние рассматривается по Особенным статьям УК.
Гинсенозид Rf ингибирует индукцию циклооксигеназы-2 через гамма-рецептор, активируемый пролифератором пероксисом, в клетках A549
J Ginseng Res. 2019 Apr; 43 (2): 319–325.
, 1, ☆ , 1, ☆ , 1 , 1 , 2 , 2 , 3 , 4 , 5 и 000 ∗Хивон Сонг
1 Кафедра биологических наук и биотехнологии, Колледж наук о жизни, Седжонгский университет, Сеул, Республика Корея
Джунву Парк
1 Кафедра биологических наук и биотехнологий, Колледж естественных наук, Университет Седжон, Сеул, Республика Корея
КеунО Чой
1 Кафедра биологических наук и биотехнологии, Колледж наук о жизни, Университет Седжон, Сеул, Республика Корея
Jeonggeun Lee
1 Кафедра биологических наук и биотехнологии , Колледж наук о жизни, Университет Седжон, Сеул, Республика Корея
Джи Чен
2 Фармацевтический факультет, Университет Сунгюнкван, Сувон, Кёнгидо, Республика lic of Korea
Hyun-Ju Park
2 Фармацевтическая школа, Университет Сунгюнкван, Сувон, Кенги-до, Республика Корея
Byeung-Il Yu
3 Лаборатория разработки продуктов, Korea Ginseng Corp, Тэджон, Республика Корея
Mitsuru Iida
4 HIYOSHI Corporation, Omihachiman, Shiga, Japan
Mee-Ra Rhyu
5 Отдел исследований функционального питания, Корейский научно-исследовательский институт пищевых продуктов, Чолла-Пукто, Республика Корея
YoungJoo Lee
1 Кафедра биологических наук и биотехнологии, Колледж наук о жизни, Седжонгский университет, Сеул, Республика Корея
1 Кафедра бионауки и биотехнологии, Колледж естественных наук, Университет Седжон, Сеул, Республика Корея
2 Фармацевтический факультет Университета Сунгюнкван, Сувон, Кёнгидо, Республика Корея
3 Лаборатория o f Разработка продуктов, Korea Ginseng Corp, Тэджон, Республика Корея
4 HIYOSHI Corporation, Омихатиман, Сига, Япония
5 Подразделение исследований функциональных пищевых продуктов, Корейский научно-исследовательский институт пищевых продуктов, Чолла-Пукто, Республика Корея
∗ Автор, ответственный за переписку.
Кафедра биологических наук и биотехнологии, Университет Седжон, Кван-Джин-Гу, Сеул 05006, Республика Корея. rk.ca.gnojes@eeljy☆ Эти авторы внесли равный вклад в эту работу.
Поступила 12.05.2018 г .; Пересмотрено 14 ноября 2018 г .; Принято 26 ноября 2018 г.
Авторское право © Корейское общество женьшеня, 2018 г., опубликовано Elsevier Korea LLC.Это статья в открытом доступе под лицензией CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).
Эта статья цитируется в других статьях в PMC.Abstract
Предпосылки
Гинзенозид Rf — сапонин женьшеня, обнаруженный только в Panax ginseng , который влияет на метаболизм липидов. Он также обладает нейропротекторными и противовоспалительными свойствами. Ранее мы показали, что корейский красный женьшень (KRG) подавляет экспрессию циклооксигеназы-2 (COX-2) посредством гипоксии через гамма-рецептор, активируемый пролифератором пероксисом (PPARγ). Целью настоящего исследования было оценить возможность использования гинсенозида Rf в качестве активного ингредиента KRG в ингибировании индуцированного гипоксией COX-2 через PPARγ.
Методы
Эффекты гинсенозида Rf на активацию ЦОГ-2 гипоксией и его антимиграционные эффекты оценивали на клетках A549. Докинг гинсенозида Rf выполняли со структурой PPARγ с использованием Surflex-Dock в Sybyl-X 2.1.1.
Результаты
Уровни белка PPARγ и активность промотора элемента ответа пролифератора пероксисом стимулировались гинсенозидом Rf. Ингибирование экспрессии COX-2 гинсенозидом Rf блокировалось PPARγ-специфическим ингибитором, T0070907.Ингибитор PPARγ также блокировал способность гинсенозида Rf подавлять миграцию клеток в условиях гипоксии. Результаты моделирования докинга показывают, что гинсенозид Rf связывается с активным сайтом PPARγ.
Выводы
Наши результаты демонстрируют, что гинсенозид Rf ингибирует индуцированную гипоксией экспрессию COX-2 и клеточную миграцию, которые зависят от активации PPARγ. Эти результаты предполагают, что гинсенозид Rf обладает противовоспалительным действием в условиях гипоксии. Более того, анализ стыковки гинсенозида Rf с активным сайтом PPARγ предполагает, что соединение связывается с PPARγ в положении, аналогичном положению известных агонистов.
Ключевые слова: COX-2, гинзенозид Rf, гипоксия, PPARγ
1. Введение
Род Panax семейства Araliaceae, широко известный как женьшень, является репрезентативной лекарственной травой, которая использовалась в азиатских странах. более 2000 лет. Его недавнее использование не ограничивается Азией, но распространилось на рынок западных стран и оценивается в 2 084 миллиона долларов, включая корень женьшеня и продукты его переработки [1]. Мировая популярность потребления женьшеня косвенно подтверждает эффективность женьшеня и научно доказала его фармакологию [1], [2].В частности, женьшень уменьшает воспаление, и исследования
Сапонины, известные как гинзенозиды, широко считаются наиболее биологически активными соединениями женьшеня [8]. Отдельные или неочищенные смеси сапонинов на протяжении многих лет считались ответственными за большинство фармакологических эффектов женьшеня [9].
Гипоксия означает общее снижение содержания кислорода в тканях, характерное для солидных опухолей, и вызывает метастазирование и инвазию клеток [16].
Производство циклооксигеназы-2 (ЦОГ-2) увеличивается за счет различных факторов, таких как гипертонус, липополисахарид, цитокины и гипоксия [17], [18], [19], [20].Повышенная регуляция ЦОГ-2 увеличивает риск метастазирования раковых клеток, а подавление ЦОГ-2 снижает образование опухолей и метастазирование [21], [22]. Эпителиальные клетки молочных желез содержат гамма-рецептор, активируемый пролифератором пероксисом (PPARγ), который важен для образования опухолей молочной железы и связан с ЦОГ-2 [23]. Согласно этим наблюдениям, ингибирование ЦОГ-2 важно для предотвращения инвазии раковых клеток, вызванной гипоксией.
PPARγ является ключевым регулятором адипоцитов и в основном присутствует в жировой ткани.PPARγ также участвует в регуляции воспаления, контролируя экспрессию COX-2 с помощью элемента ответа PPAR в промоторе COX-2 [24], [25], [26]. Однако эффекты PPARγ могут варьироваться в зависимости от типа клеток, и некоторые исследования показали, что PPARγ активирует или ингибирует COX-2 посредством PPARγ-зависимых или независимых механизмов [27], [28], [29].
Ранее мы сообщали, что корейский красный женьшень (KRG) подавлял экспрессию COX-2 в условиях гипоксии через PPARγ [30]. В этом исследовании мы стремились определить, является ли гинсенозид Rf активным компонентом KRG, ведущим к ингибированию индуцированной гипоксией экспрессии COX-2 через PPARγ
2.Материалы и методы
2.1. Материалы
Гинзенозид Rf был поставлен Корейской кооперацией по женьшеню (Тэджон, Корея). 17-β-эстрадиол, дигидротестостерон и бикалутамид были приобретены у Sigma (Сент-Луис, Миссури, США). T0070907 был приобретен в компании Selleckchem (Хьюстон, Техас, США). ICI 182,780 (ICI) был приобретен у фармацевтической компании ZENECA (Токрис, Великобритания). Фетальная бычья сыворотка и пенициллин / стрептомицин были приобретены у GIBCO Invitrogen (Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США). Набор для подсчета клеток-8 (CCK-8) был куплен у ENZO (Enzo LifeSciences, Лаузен, Швейцария).Анти-COX-2 использовали от Cayman Chemical (160106), анти-β-актин использовали от Sigma (A5441).
Анти-сиртуин-1 (SIRT-1), анти-PPARγ и гамма-коактиватор-1 альфа рецептор, активируемый пролифератором пероксисом, использовали от Santa Cruz Biotechnology (sc-15404, SC-7196, SC-13067).
2.2. Культура клеток и условия гипоксии
Поддержание эпителия легких человека A549 и клеток MCF-7 рака груди человека, как описано ранее [30]. Клетки AR-EcoScreen ™ (подарок от Dr, Mitsuru Iida, Hiyoshi Corporation, Japan) были получены из линии клеток яичника китайского хомячка, которая стабильно трансформирована плазмидой, содержащей элемент андрогенного ответа (ARE), слитый с геном люциферазы, и плазмида, кодирующая последовательность кДНК рецептора андрогена (AR) [31].Клетки AR-EcoScreen ™ поддерживали в среде Игла, модифицированной Дульбекко / среде F-12, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки. В условиях гипоксии клетки A549 инкубировали при уровне CO 2 , равном 5%, с 1% O 2 , сбалансированным с N 2 , с использованием гипоксической камеры (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA).
2.3. Трансфекция и анализы репортерного гена люциферазы.
Клетки A549 высевали с плотностью 3 × 10 4 клеток / лунку. Через 1-2 дня плазмиды временно трансфицировали с использованием полиэтиленимина (Polysciences, Warrington, PA, USA).Анализ репортерного гена люциферазы проводили, как описано ранее [30]. Репортерная конструкция люциферазы светлячка для элемента ответа PPAR (PPRE) была любезно предоставлена доктором Роном Эвансом (Институт Солка, Сан-Диего, Калифорния, США). Репортер люциферазы светлячка СОХ-2 был любезно предоставлен доктором Хироясу Иноуэ (Женский университет Нара, Нара, Япония). Элемент ответа на эстроген (ERE) -Luc, репортерная конструкция люциферазы светлячка, содержащая три копии элемента ответа на эстроген вителлогенин, была приобретена у Addgene (Кембридж, Массачусетс, США, плазмида Addgene номер 11354).
2.4. Вестерн-блоттинг
Вестерн-блоттинг выполняли, как описано ранее [30]. Мембраны обрабатывали антителами против COX-2 (1: 1000), β-актина (1: 5000), SIRT-1 (1: 1000) и PPARγ (1: 1000).
2,5. Анализы миграции клеток
Анализ миграции выполняли с использованием трансвелл (трансвелл с размером пор 8,0 мкм, Корнинг, Нью-Йорк, США), как сообщалось ранее [32]. После инкубации в условиях нормоксии или гипоксии в течение 24 часов мигрировавшие клетки наблюдали и подсчитывали с помощью светового микроскопа.
2.6. Анализ CCK-8.
Клетки A549 высевали с плотностью 5 × 10 3 клеток / лунку в 96-луночный планшет. Через 24 часа указанные химические вещества инкубировали при нормоксии или гипоксии в течение 24 часов. Анализ CCK-8 выполняли, как описано ранее [33].
2.7. Получение белковых структур
Кристаллическая структура PPARγ (PDB ID: 2ATH) в комплексе с агонистом BPR1H036 (2-этановая кислота) была загружена из RCSB Protein Data Bank [34], [35]. Структура PPARγ была оптимизирована для стыковки следующим образом: все молекулы воды были удалены из кристаллической структуры, и связанный лиганд был извлечен, а затем приготовлен с помощью модуля подготовки белка Sybyl-X 2.
1.1 (Certara Inc., Принстон, Нью-Джерси, США) с параметрами по умолчанию.
2.8. Стыковка с помощью Surflex-Dock
Гинзенозид Rf стыковался с подготовленной кристаллической структурой PPARγ с помощью Surflex-Dock в Sybyl-X 2.1.1. Программа генерировала протомол в активном центре PPARγ с порогом 0,4 и набором раздува 1 вокруг встроенной молекулы BPR1H036. Остатки (SER289, HIS323, HIS449 и TYR473), которые, как обнаружено, взаимодействуют с BPR1H036, считались ключевыми остатками в активном центре PPARγ.Основная настройка составляла 50 решений для гибкой стыковки лиганда, а остальные параметры принимали настройки Surflex-Dock Geom по умолчанию. Результаты стыковки анализировали с помощью программы Glide (Schrödinger LLC, NY, США).
2.9. Статистический анализ
Все данные были проанализированы и выражены как средние значения и стандартные отклонения. Двусторонний непарный тест Стьюдента t применяли с использованием программного обеспечения SPSS (версия 23.
0; IBM, Армонк, Нью-Йорк, США).
3. Результаты
3.1. Гинсенозид Rf индуцирует транскрипционную активность PPARγ и экспрессию его белка в клетках A549
Ранее мы показали, что KRG ингибирует индуцированную гипоксией активацию COX-2 через PPARγ [32]. В поисках активного компонента KRG, который ингибирует индуцированный гипоксией COX-2, был выбран гинсенозид Rf, поскольку предыдущие исследования показали, что гинсенозид Rf может модулировать PPARγ [36]. Для оценки эффектов гинсенозида Rf на активацию ЦОГ-2, вызванную гипоксией, клетки A549 предварительно обрабатывали гинсенозидом Rf в течение 1 часа и подвергали воздействию гипоксических условий в течение 24 часов.Гинсенозид Rf увеличивал уровни белка SIRT-1 и PPARγ по сравнению с гипоксией (A). В то же время 10 мкМ гинсенозида Rf эффективно блокировали повышающую регуляцию транскрипционной активности ЦОГ-2 и уровня белка при гипоксии (А и В). Затем мы хотели проверить, активирует ли гинсенозид Rf репортерную активность люциферазы PPARγ (C).
Гинсенозид Rf значительно активировал репортерную активность люциферазы PPRE. Гинсенозид Rf-индуцированная активация гена люциферазы PPRE блокировалась обработкой антагонистом PPARγ, T0070907, что указывает на то, что активация гена люциферазы PPRE, индуцированная гинзенозидом Rf, является PPARγ-специфической.На жизнеспособность клеток не влияли концентрации 1–10 мкл гинсенозида Rf в течение 24 часов в нормоксических или гипоксических условиях (D).
Гинсенозид Rf индуцирует транскрипционную активность PPARγ и экспрессию его белка. (A) Клетки A549 обрабатывали гинсенозидом Rf в концентрации 1–10 мкМ в течение 24 часов в условиях гипоксии и анализировали с помощью вестерн-блоттинга. Экспрессия белков была нормализована по содержанию β-актина в каждом образце. (B) Клетки A549 временно трансфицировали репортерным геном COX-2-люциферазы. На следующий день клетки A549 культивировали в среде, содержащей носитель или гинсенозид Rf (10 мкМ), в течение 24 часов в условиях гипоксии и определяли активность люциферазы.
(C) Клетки A549 временно трансфицировали репортерным геном PPRE-люциферазы. На следующий день клетки A549 культивировали в среде, содержащей носитель или гинсенозид Rf (1-10 мкМ), или агонист PPARγ розиглитазон (1 мкМ), или антагонист PPARγ T0070907 (5 мкМ) в течение 48 часов, и определяли активность люциферазы. (D) Клетки A549 инкубировали с гинсенозидом Rf в концентрации 1–10 мкМ в течение 24 часов в условиях нормоксии или гипоксии и проводили анализ CCK-8. Все эксперименты повторяли не менее трех раз. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение ( N = 3).Все эксперименты повторяли не менее трех раз. * представляет p <0,05, ** представляет p <0,01, p > 0,05 обозначается «н.с.» для не значительного. ЦОГ-2, циклооксигеназа-2; PPARγ, гамма-рецептор, активируемый пролифератором пероксисом; PPRE, элемент ответа PPAR; CCK-8, набор для подсчета клеток-8; SIRT-1, сиртуин-1; SD, стандартное отклонение.
3.2. Гинсенозид Rf ингибирует индуцированную гипоксией экспрессию белка COX-2 и транскрипционную активность COX-2 посредством PPARγ в клетках A549
Чтобы определить, связана ли активация PPRE с ингибированием COX-2 гинсенозидом Rf, уровни белка COX-2 были измерены с использованием T0070907 ( А).
Подавление индуцированной гипоксией экспрессии белка COX-2 гинсенозидом Rf блокировалось T0070907, что указывает на то, что ответ включает PPARγ. Для дальнейшей идентификации участия в активации PPARγ измеряли активность промотора COX-2 после обработки T0070907 (B). Эти результаты предполагают, что подавление стимулированного гипоксией COX-2 гинсенозидом Rf в клетках A549 зависит от PPARγ.
Активация PPARγ необходима для гинсенозида Rf-опосредованного ингибирования индуцированной гипоксией экспрессии СОХ-2.(A) Клетки A549 предварительно обрабатывали носителем или гинсенозидом Rf (10 мкМ) и / или T0070907 (5 мкМ) в течение 1 часа перед обработкой гипоксией в течение 24 часов. Готовили общие белки и определяли уровни белка СОХ-2 с помощью вестерн-блоттинга. Экспрессию белков нормировали на содержание β-актина в каждом образце. (B) Клетки A549 временно трансфицировали репортерным геном люциферазы COX-2. На следующий день клетки A549 культивировали в среде, содержащей носитель или гинсенозид Rf (10 мкМ) и / или антагонист PPARγ T0070907 (5 мкМ), в течение 24 часов в условиях гипоксии и определяли активность люциферазы.
Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение ( N = 3). Все эксперименты повторяли не менее трех раз. * представляет p <0,05, ** представляет p <0,01, *** представляет p <0,001. ЦОГ-2, циклооксигеназа-2; PPARγ, гамма-рецептор, активируемый пролифератором пероксисом; SD, стандартное отклонение.
3.3. Гинсенозид Rf подавляет индуцированную гипоксией клеточную миграцию в клетках A549
Чтобы подтвердить, подавляет ли гинсенозид Rf клеточную миграцию через PPARγ, способность к миграции исследовали с использованием T0070907 в клетках A549.Как показано на фиг.4, гинсенозид Rf ингибировал клеточную миграцию в условиях гипоксии. Ингибирование индуцированной гипоксией клеточной миграции гинсенозидом Rf в значительной степени блокировалось T0070907. Эти результаты предполагают, что гинсенозид Rf ингибирует индуцированную гипоксией миграцию клеток через PPARγ.
Гинсенозид Rf ингибирует индуцированную гипоксией клеточную миграцию клеток A549 через PPARγ.
Клетки A549 предварительно обрабатывали гинсенозидом Rf (10 мкМ) и / или T0070907 (5 мкМ) в течение 1 часа и инкубировали в условиях гипоксии в течение 24 часов.Клетки, которые мигрировали через мембраны, фиксировали и подсчитывали с помощью световой микроскопии. Гистограмма показывает относительные перемещенные ячейки. Ячейки в нижней части были подсчитаны и представлены на графике ниже. Масштабная линейка представляет 100 мкм. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение ( N = 3). Все эксперименты повторяли не менее трех раз. * представляют p <0,05, ** представляют p <0,01. PPARγ, гамма-рецептор, активируемый пролифератором пероксисом; SD, стандартное отклонение.
3.4. Гинсенозид Rf не имеет рецептора эстрогена или транскрипционной активности AR.
Чтобы определить, индуцирует ли гинсенозид Rf другие рецепторы ядерных гормонов, были исследованы транскрипционные активности рецептора эстрогена (ER) и AR. Как показано на A, 17-β-эстрадиол в качестве положительного контроля индуцировал ERE-транскрипционную активность в концентрации 10 нМ в клетках MCF-7.
Однако гинсенозид Rf не индуцировал транскрипционную активность ER. Мы также проанализировали транскрипционную активность гинсенозида Rf (B) против ERE.Гинсенозид Rf не проявлял транскрипционной активности против ER. Кроме того, гинсенозид Rf исследовали на транскрипционную активность ARE (C). Гинсенозид Rf не проявлял транскрипционной активности AR. Наконец, мы проверили транскрипционную активность гинсенозида Rf (D) против ARE. Гинсенозид Rf не проявлял транскрипционной активности против AR. Эти результаты предполагают, что гинсенозид Rf специфически активирует PPARγ, а не ER или AR.
Эффекты гинсенозида Rf на активацию транскрипции эстрогеновых и андрогенных рецепторов.(A) Клетки MCF-7 временно трансфицировали репортерным геном ERE-люциферазы. На следующий день клетки MCF-7 культивировали в среде, содержащей носитель или гинсенозид Rf (1–10 мкМ) и / или E2 (10 нМ), в течение 24 часов и определяли активность люциферазы. (B) Клетки MCF-7 временно трансфицировали репортерным геном ERE-люциферазы.
На следующий день клетки MCF-7 предварительно обрабатывали носителем или гинсенозидом Rf (10 мкМ) или ICI 182,780 (1 мкМ) в течение 1 часа, а затем обрабатывали E2 (500 пМ) в течение 24 часов и определяли активность люциферазы.(C) Клетки AR-Ecoscreen стабильно трансфицировали репортерным геном AR и ARE-люциферазы. Клетки AR-Ecoscreen культивировали в среде, содержащей носитель или гинсенозид Rf (1–10 мкМ) или дигидротестостерон (ДГТ) (1 нМ), в течение 24 часов и определяли активность люциферазы. (D) Клетки AR-Ecoscreen предварительно обрабатывали носителем или гинсенозидом Rf (10 мкМ) или CDX (5 мкМ) в течение 1 часа, а затем обрабатывали DHT (1 нМ) в течение 24 часов и определяли активность люциферазы. Значения представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение ( N = 3).Все эксперименты повторяли не менее трех раз. * представляет p <0,05, ** представляет p <0,01, *** представляет p <0,001, p > 0,05 обозначается «н.с.» для не значительного.
AR, рецептор андрогенов; CDX, бикалутамид; ERE, эстрогеновый ответный элемент; SD, стандартное отклонение.
3.5. Моделирование стыковки: гинсенозид Rf вписывается в сайт связывания агониста PPARγ
. Чтобы исследовать, взаимодействует ли гинсенозид Rf напрямую с PPARγ, было выполнено моделирование молекулярного стыковки взаимодействия между гинсенозидом Rf и PPARγ ().Для сравнения, позиция связывания гинсенозида Rf была наложена на рентгеновскую позу BPR1H036, известного агониста PPARγ на основе индола (B). Общий режим связывания гинсенозида Rf, предсказанный Surflex-Dock, был аналогичен таковому для BPR1H036. В рентгеновской структуре карбоксилатная группа в полярной головке BPR1H036 образует сеть водородных связей с ключевыми остатками PPARγ, включая SER289, HIS323, HIS449 и TYR473. Глюкопиранозидная группа гинсенозида Rf также занимает этот сайт, образуя две водородные связи с SER289 и HIS449.Этот паттерн водородных связей кислотной полярной головной группы является консервативным у большинства агонистов PPARγ, что, как полагают, является важным для активности лиганда.
Более того, тетрациклический скелет гинсенозида Rf проявляет сильные гидрофобные взаимодействия с PPARγ, играя важную роль в связывании гинсенозида Rf с белком. Эти результаты показывают, что гинсенозид Rf может напрямую взаимодействовать с PPARγ; однако необходимы дальнейшие исследования, чтобы подтвердить способ связывания гинсенозида Rf с PPARγ.
Поза связывания гинсенозида Rf в активном центре PPARγ. (A) Наложение закрепленной позы гинсенозида Rf и рентгеновской позы эталонного соединения BPR1H036 (PDB id: 2ATH). Гинзенозид Rf отображается как фиолетовая палочка, а BPR1H036 — как апельсиновая палочка. Поверхность PPARγ создается программой MOLCAD и отображается как поверхность сетки. (B) Поза стыковки гинсенозида Rf в активном центре PPARγ. Гинзенозид Rf отображается как фиолетовый стержень, а окружающие его ключевые остатки отображаются как серый стержень и помечены.Водородные связи изображены желтыми пунктирными линиями. (C) 2D-изображение взаимодействия между гинсенозидом Rf и PPARγ.
PPARγ, гамма-рецептор, активируемый пролифератором пероксисом.
4. Обсуждение
Многие исследования показали, что KRG обладает антиоксидантным и противовоспалительным действием как in vitro , так и in vivo [37], [38]. Ранее мы продемонстрировали, что KRG ингибирует индуцированную гипоксией активацию ЦОГ-2 через PPARγ [30]. В поисках активного компонента KRG, который ингибирует индуцированный гипоксией COX-2, мы обнаружили, что гинсенозид Rf активирует PPARγ и подавляет индуцированный гипоксией COX-2 через PPARγ.PPARγ является членом суперсемейства ядерных рецепторов и является лиганд-зависимым фактором транскрипции [39]. PPARγ регулирует метаболизм глюкозы, накопление жирных кислот и дифференцировку адипоцитов и является мишенью противодиабетических препаратов [40], [41]. Несколько исследований показали, что гинсенозиды Rg3 и Rh3 и соединение K ингибируют адипогенез посредством регуляции экспрессии альфа PPARγ и CCAAT / enhaancer-связывающего белка в клетках 3T3-L1, первичных преадипоцитах человека и мышах [42]. Действительно, было высказано предположение, что гинсенозид Rf связывается непосредственно с активным сайтом PPARγ [36].Однако эти гинсенозиды подавляют экспрессию белка PPARγ и перилипина в клетках 3T3-L1, что указывает на антиадипогенный эффект [42]. Недавно было признано, что PPARγ играет фундаментальную роль в иммунном ответе благодаря своей способности ингибировать экспрессию воспалительных цитокинов и индуцировать дифференцировку иммунных клеток против противовоспалительных фенотипов [24]. Гесперетин, флаванон из кожуры плодов цитрусовых Citrus aurantium L , проявляет сильные противовоспалительные эффекты за счет активации PPARγ [43].Более того, фенретинид, синтетический лиганд PPARγ, индуцирует противовоспалительную активность, хотя его точный механизм полностью не изучен [44]. Наши данные согласуются с предыдущими результатами, демонстрирующими, что гинсенозид Rf модулирует PPARγ и, по-видимому, выполняет различные функции, такие как антиадипогенез и противовоспалительный процесс, в зависимости от типа клетки. В нашем исследовании гинсенозид Rf специфически ингибировал экспрессию COX-2 посредством активации PPARγ в условиях гипоксии. Наблюдаемое нами подавление COX-2 может быть связано с суммой активностей каждого компонента и их взаимодействий, поскольку гинзенозиды Rb1 и Rg1 вызвали некоторый ответ, хотя и более слабый, чем у гинсенозида Rf.Более того, ингибирование экспрессии СОХ-2 и клеточной миграции в условиях гипоксии зависело от активации PPARγ. Результаты моделирования докинга показали, что гинсенозид Rf связывается с активным сайтом PPARγ; однако необходимы дальнейшие исследования для подтверждения режима связывания.
Эти данные дают механическое объяснение эффектов гинсенозида Rf на метаболические нарушения и рак.
Конфликт интересов
Все авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Благодарности
Это исследование было поддержано грантом 2015 года Корейского общества женьшеня, предоставленным Y.J.L.
Ссылки
1. Чан T.W., But P.P., Cheng S.W., Kwok I.M., Lau F.W., Xu H.X. Дифференциация и аутентификация продуктов Panax ginseng, Panax quinquefolius и ginseng с помощью ВЭЖХ / МС. Anal Chem. 2000. 72: 1281–1287. [PubMed] [Google Scholar] 2. Бхаттачарья С.К., Митра С.К. Анксиолитическая активность корней женьшеня Panax: экспериментальное исследование. J Ethnopharmacol.1991; 34: 87–92. [PubMed] [Google Scholar] 3. Jin Y., Kotakadi V.S., Ying L., Hofseth A.B., Cui X., Wood P.A., Windust A., Matesic L.E., Pena E.A., Chiuzan C. Американский женьшень подавляет воспаление и повреждение ДНК, связанное с колитом у мышей. Канцерогенез. 2008. 29: 2351–2359. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 4. Park J.S., Shin J.A., Jung J.S., Hyun J.W., Van Le T.K., Kim D.H., Park E.M., Kim H.S. Противовоспалительный механизм соединения K в активированной микроглии и его нейропротекторное действие при экспериментальном инсульте у мышей.J Pharmacol Exp Ther. 2012; 341: 59–67. [PubMed] [Google Scholar] 5. Ян Ю., Ян В.С., Ю Т., Сунг Г.Х., Пак К.В., Юн К., Сон Ю.Дж., Хван Х., Квак Ю.С., Ли К.М. ATF-2 / CREB / IRF-3-целевое противовоспалительное действие водного экстракта корейского красного женьшеня. J Ethnopharmacol. 2014; 154: 218–228. [PubMed] [Google Scholar] 6. Ким Х.Дж., Ким П., Шин С.Ю. Всесторонний обзор терапевтических и фармакологических эффектов женьшеня и гинзенозидов на центральную нервную систему. J Ginseng Res. 2013; 37: 8–29. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 7.Ли Б., Сур Б., Парк Дж., Ким С.Х., Квон С., Йом М., Шим И., Ли Х., Хам Д.Х. Гинзенозид rg3 облегчает вызванные липополисахаридом нарушения обучения и памяти за счет противовоспалительной активности у крыс . Biomol Ther (Сеул) 2013; 21: 381–390. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8. Пэк К.Ю., Чакрабарти Д., Хан Э.Дж. Применение биореакторных систем для крупномасштабного производства садовых и лекарственных растений. Культ растительных клеток, тканей, органов. 2005. 81: 287–300. [Google Scholar] 9. Каку Т., Мията Т., Уруно Т., Сако И., Киношита А. Химико-фармакологические исследования сапонинов женьшеня Panax C. A. Meyer. II. Фармакологическая часть. Arzneimittelforschung. 1975. 25: 539–547. [PubMed] [Google Scholar] 10. Ли С.М., Пэ Б.С., Пак Х.В., Ан Н.Г., Чо Б.Г., Чо Ю.Л., Квак Ю.С. Характеристика корейского красного женьшеня ( Panax ginseng Meyer): история, методы приготовления и химический состав. J Ginseng Res. 2015; 39: 384–391. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 11. Ли Дж. У., Чхве Б.Р., Ким И.С., Чой Д.Дж., Ли Ю.С., Ким Г.С., Пэк Н.И., Ким С.Ю., Ли Д.Й. Комплексное профилирование и количественная оценка гинсенозидов в корне, стебле, листьях и ягодах женьшеня Panax с помощью UPLC-QTOF / MS. Молекулы. 2017; 22 (12): E2147. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 12. Ahn S., Siddiqi M.H., Aceituno V.C., Simu S.Y., Yang D.C. Подавление активации MAPKs / NF-kappaB индуцирует противовоспалительное действие гинсенозида Rf в кишечнике в клетках HT-29 и RAW264.7. Иммунол Инвест. 2016; 45: 439–449.[PubMed] [Google Scholar] 13. Чой К., Ким М., Рю Дж., Чой С. Гинзенозидные соединения K и Rh (2) ингибируют индуцированную фактором некроза опухоли альфа активацию путей NF-kappaB и JNK в астроглиальных клетках человека. Neurosci Lett. 2007; 421: 37–41. [PubMed] [Google Scholar] 14. Ли Х., Гонсалес Ф.Дж., Юн М. Гинсенозид Rf, компонент женьшеня, регулирует метаболизм липопротеинов через рецептор альфа, активируемый пролифератором пероксисом. Biochem Biophys Res Commun. 2006; 339: 196–203. [PubMed] [Google Scholar] 15.Li Y., Wang Q., Yao X.M., Li Y. Индукция экспрессии генов CYP3A4 и MDR1 байкалином, байкалеином, хлорогеновой кислотой и гинсенозидом Rf посредством конститутивных путей, опосредованных рецепторами андростана и прегнана X. Eur J Pharmacol. 2010; 640: 46–54. [PubMed] [Google Scholar] 16. Арсено Д., Брошю-Годро К., Шарбонно М., Дюбуа К. Активность деацетилазы HDAC6 необходима для индуцированного гипоксией образования инвадоподий и клеточной инвазии. Plos One. 2013; 8 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 17.Фреденбург Л.Е., Ма Дж., Перрелла М.А. Ингибирование циклооксигеназы-2 и гипоксия-индуцированная легочная гипертензия: влияние на ремоделирование и сократимость легочных сосудов. Trends Cardiovasc Med. 2009; 19: 31–37. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18. Kaidi A., Qualtrough D., Williams A.C., Paraskeva C. Прямая активация транскрипции циклооксигеназы-2 с помощью фактора, индуцируемого гипоксией (HIF) -1, способствует выживанию колоректальных опухолевых клеток и увеличивает транскрипционную активность HIF-1 во время гипоксии.Cancer Res. 2006; 66: 6683–6691. [PubMed] [Google Scholar] 19. Ли Дж.Дж., Нацуизака М., Охаши С., Вонг Г.С., Такаока М., Михайлира К.З., Будо Д., Тобиас Дж.В., Канаи М., Сиракава Ю. Гипоксия активирует ось синтазы циклооксигеназы-2-простагландина E. Канцерогенез. 2010. 31: 427–434. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 20. Zhao L., Wu Y., Xu Z., Wang H., Zhao Z., Li Y., Yang P., Wei X. Вовлечение передачи сигналов COX-2 / PGE2 в индуцированный гипоксией ангиогенный ответ в эндотелиальных клетках. J Cell Mol Med.2012; 16: 1840–1855. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 21. Стасинопулос И., Шах Т., Пенет М.Ф., Кришнамачари Б., Бхуджвалла З.М. ЦОГ-2 при раке: гордиев узел или ахиллесова пята? Front Pharmacol. 2013; 4: 34. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 22. Цудзи М., Кавано С., Дюбуа Р. Экспрессия циклооксигеназы-2 в раковых клетках толстой кишки человека увеличивает метастатический потенциал. Proc Natl Acad Sci U S. A. 1997; 94: 3336–3340. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 23. Апостоли А.Дж., Рош Дж.M., Schneider M.M., SenGupta S.K., Di Lena M.A., Rubino R.E., Peterson N.T., Nicol C.J. Противоположные роли в передаче сигналов и активации PPARgamma, специфичных для эпителия молочной железы, во время прогрессирования опухоли молочной железы. Молочный рак. 2015; 14: 85. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 24. Tyagi S., Gupta P., Saini A.S., Kaushal C., Sharma S. Рецептор, активируемый пролифератором пероксисом: семейство ядерных рецепторов, роль в различных заболеваниях. J Adv Pharm Technol Res. 2011; 2: 236–240. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 25.Хазра С., Дубинетт С.М. Циглитазон опосредует COX-2-зависимое подавление PGE2 в клетках немелкоклеточного рака легких человека. Простагландины Leukot Essent Fatty Acids. 2007; 77: 51–58. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 26. Патель Л., Пасс И., Коксон П., Даунс К.П., Смит С.А., Макфи К.Х. Подавляющее опухоль и противовоспалительное действие агонистов PPARgamma опосредуются повышающей регуляцией PTEN. Curr Biol. 2001; 11: 764–768. [PubMed] [Google Scholar] 27. Брен-Маттисон Ю., Мейер А.М., Ван Путтен В., Ли Х., Кун К., Стирман Р., Вейзер-Эванс М., Винн Р.А., Хизли Л.Э., Неменофф Р.А. Противоопухолевые эффекты гамма-рецептора, активируемого пролифератором пероксисом, в клетках немелкоклеточного рака легкого опосредуются подавлением циклооксигеназы-2 посредством ингибирования ядерного фактора-каппаВ. Mol Pharmacol. 2008. 73: 709–717. [PubMed] [Google Scholar] 28. Патель К.М., Райт К.Л., Уиттакер П., Чакраварти П., Уотсон М.Л., Уорд С.Г. Дифференциальная модуляция экспрессии ЦОГ-2 в эпителиальных клетках дыхательных путей A549 структурно различными агонистами PPAR (гамма): доказательства различных функциональных эффектов, которые не зависят от NF — (каппа) B и PPAR (гамма) сигнал ячейки.2005; 17: 1098–1110. [PubMed] [Google Scholar] 29. Мид Э.А., Макинтайр Т.М., Циммерман Г.А., Прескотт С.М. Пролифераторы пероксисом усиливают экспрессию циклооксигеназы-2 в эпителиальных клетках. J Biol Chem. 1999; 274: 8328–8334. [PubMed] [Google Scholar] 30. Сонг Х., Ли Ю. Дж. Ингибирование индуцированной гипоксией циклооксигеназы-2 корейским красным женьшенем зависит от гамма-рецептора, активируемого пролифератором пероксисом. J Ginseng Res. 2017; 41: 240–246. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 31. Сато К., Охьяма К., Aoki N., Iida M., Nagai F. Исследование антиандрогенных эффектов бисфенола, диглицидилового эфира (BADGE), диглицидилового эфира бисфенола F (BFDGE) и их производных с использованием клеток, стабильно трансфицированных рецептором андрогенов человека, AR-EcoScreen. Food Chem Toxicol. 2004; 42: 983–993. [PubMed] [Google Scholar] 32. Park J., Shim M.K., Jin M., Rhyu M.R., Lee Y. Метилсирингат, агонист TRPA1, подавляет индуцированную гипоксией циклооксигеназу-2 в клетках рака легких. Фитомедицина. 2016; 23: 324–329. [PubMed] [Google Scholar] 33.Song H., Park J., Bui P., Choi K., Gye MC, Hong YC, Kim JH, Lee YJ. Бисфенол A индуцирует COX-2 через путь митоген-активируемой протеинкиназы и связан с уровнями воспаления. маркеры в пожилом населении. Environ Res. 2017; 158: 490–498. [PubMed] [Google Scholar] 34. Mahindroo N., Huang CF, Peng YH, Wang CC, Liao CC, Lien TW, Chittimalla SK, Huang WJ, Chai CH, Prakash E. Новые агонисты рецепторов, активируемых пролифератором пероксисом на основе индола: дизайн, SAR, структурная биология и биологическая активность.J Med Chem. 2005; 48: 8194–8208. [PubMed] [Google Scholar] 35. Sohn Y.S., Lee Y., Park C., Hwang S., Kim S., Back A., Son M., Suh J.K., Kim H.H., Lee K.W. Идентификация фармакофоров для агонистов гамма-рецепторов, активируемых пролифератором пероксисом. Bull Korean Chem Soc. 2011; 32: 201–207. [Google Scholar] 36. Сирадж Ф.М., Натараджан С., Хук М.А., Ким Ю.Дж., Ян Д.К. Структурное исследование гинсенозида Rf с основным транскрипционным фактором адипогенеза PPARgamma и его влияние на адипоциты. J Ginseng Res.2015; 39: 141–147. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 37. Kim E.H., Kim I.H., Lee M.J., Thach Nguyen C., Ha J.A., Lee S.C., Choi S., Choi K.T., Pyo S., Rhee D.K. Эффект антиоксидантного стресса красного женьшеня в головном мозге опосредуется репрессией пептидиларгининдезиминазы типа IV (PADI4) через повышение уровня β-регуляции рецептора эстрогена (ER). J Ethnopharmacol. 2013; 148: 474–485. [PubMed] [Google Scholar] 38. Хонг С.Е., Лю С.Ю. Противовоспалительное и антиоксидантное действие экстракта корейского красного женьшеня на кератиноциты человека.Immune Netw. 2011; 11: 42–49. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 39. Ли М., Паскуаль Г., Гласс С.К. Гамма-зависимая репрессия индуцибельной синтазы оксида азота рецептора, активируемого пролифератором пероксисом. Mol Cell Biol. 2000; 20: 4699–4707. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 40. Lehmann J.M., Moore L.B., Smith-Oliver T.A., Wilkison W.O., Willson T.M., Kliewer S.A. Антидиабетический тиазолидиндион является лигандом с высоким сродством к гамма-рецептору, активируемому пролифератором пероксисом (PPAR гамма) J Biol Chem.1995; 270: 12953–12956. [PubMed] [Google Scholar] 41. Сирсбек Р., Нильсен Р., Мандруп С. PPAR-гамма в дифференцировке и метаболизме адипоцитов — новые выводы из полногеномных исследований. FEBS Lett. 2010; 584: 3242–3249. [PubMed] [Google Scholar] 42. Zhang L., Virgous C., Si H. Женьшень и ожирение: наблюдения и понимание в культивируемых клетках, животных и людях. J Nutr Biochem. 2017; 44: 1–10. [PubMed] [Google Scholar] 43. Чен X., Дин Х.В., Ли Х.Д., Хуан Х.М., Ли X.F., Ян Ю., Чжан Ю.Л., Пан X.Y., Хуанг К., Мэн Х.М. Производное гесперетина-14 снимает воспаление, активируя PPAR-гамма у мышей с CCl4-индуцированным острым повреждением печени и RAW264.7-клетками, обработанными LPS. Toxicol Lett. 2017; 274: 51–63. [PubMed] [Google Scholar] 44. Lin C.H., Lee S.Y., Zhang C.C., Du Y.F., Hung H.C., Wu H.T., Ou H.Y. Фенретинид подавляет медиаторы воспаления макрофагов и контролирует гипертензию у крыс со спонтанной гипертензией через гамма-путь рецептора, активируемого пролифератором пероксисом. Drug Des Devel Ther.2016; 10: 3591–3597. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]Сжигание биомассы как источник атмосферных газов CO, h3, N2O, NO, Ch4Cl и COS
Wong, C. S. Mar. Pollut. Бык. 9 , 257–264 (1978).
CAS Статья Google ученый
Woodwell, G. M. et al. Наука 199 , 141–146 (1978).
ADS CAS Статья Google ученый
Болин, Б. Наука 196 , 613–615 (1977).
ADS CAS Статья Google ученый
Зайлер В. и Крутцен П. Дж. Изменение климата (в печати).
Дарли, Э. Ф., Берлесон, Ф. Р., Матир, Э. Х. и Миддлтон, Дж. Т. Загрязнение воздуха. Контрольная задница. J. 11 , 685–690 (1966).
Артикул Google ученый
Герстле Р.W. & Kemnitz, D. A. Air Pollut. Контрольная задница. J. 17 , 324–327 (1967).
CAS Статья Google ученый
Бубель, Р. У., Дарли, Э. Ф. и Шак, Э. А. Загрязнение воздуха. Контрольная задница. J. 19 , 497–500 (1961).
Артикул Google ученый
Malte, P. C. Washington State Univ. Бык .339 (Пуллман, Вашингтон, 1975 г.).
Google ученый
Шорт, Дж. Э. Представитель по контролю качества воздуха . № 74-1 (Департамент гигиены окружающей среды, Альбукерке, 1974 г.).
Google ученый
Робинсон, Э. и Роббинс, Р. К. в книге «Глобальные последствия загрязнения окружающей среды», (изд. Сингер, В. Ф.) (Reidel, Dordrecht, 1970).
Google ученый
Ван, В.К., Юнг, Ю. Л., Лацис, А. А., Мо, Т. и Хансен, Дж. Э. Science 194 , 685–690 (1976).
ADS CAS Статья Google ученый
Wofsy, S.C. A. Rev. Планета Земля. Sci. 4 , 441–469 (1976).
ADS CAS Статья Google ученый
Nicolet, M. Rev. geophys. Space Phys. 13 , 593 (1975).
ADS Статья Google ученый
Фишман Дж. И Крутцен П. Дж. Nature 274 , 855–858 (1978).
ADS CAS Статья Google ученый
Duewer, W. H., Wuebbles, D. J., Ellsaesser, H. W. & Chang, J. S. J. geophys. Res. 82 , 935–942 (1977).
ADS CAS Статья Google ученый
Крутцен, П. Дж. Geophys. Res. Lett. 3 , 73–76 (1976).
ADS CAS Статья Google ученый
Лавлок, Дж. Э. Nature 256 , 193–197 (1975).
ADS CAS Статья Google ученый
Родин Л.Е и Базилевич Н. И. Производство и круговорот полезных ископаемых в наземной растительности (Оливер и Бойд, Эдинбург, 1966).
Google ученый
Seiler, W. Tellus 26 , 116 (1974).
ADS CAS Статья Google ученый
Bach, W. Bonner met. Abh. 24 , 1–51 (1976).
Google ученый
Шмидт, Х.U. Tellus 26 , 78–90 (1974).
ADS CAS Статья Google ученый
Эхальт, Д. Х. Теллус 26 , 58 (1974).
ADS CAS Статья Google ученый
Isichei, A.O. & Sanford, W. W. Семинар SCOPE / ЮНЕП по круговороту азота в экосистеме Западной Африки (IITA, Ibadan, 1978).
Google ученый
Nye, P.H. И Гренландия, Д.Дж. Почва при сменной культивации (Техническое сообщение № 51, Бюро почв Содружества, Харпенден, 1960).
Google ученый
Дельвиче К. и Ликенс Г. Э. в книге Глобальные химические циклы и их изменения человеком (изд. Штум, В.) 73–88 (Dahlen Konferenzen, Berlin, 1977).
Google ученый
Clements, H. B. & McMahon, C. K. Thermochim. Acta (представлен).
Чанг, Дж. С. и Пеннер, Дж. Э. Atmos. Envir. 12 , 1867–1873 (1978).
CAS Статья Google ученый
Söderlund, R. & Svensson, B.H. Ecol. Бюл., Стокгольм, , , 22, , 23 (1976).
Google ученый
Chameides, W.L., Stedman, D.H., Dickerson, R., Rusch, D. W. & Cicerone, R.J. J. atmos. Sci. 34 , 143 (1977).
ADS CAS Статья Google ученый
Lewis, W. M., Jr & Weibezahn, F. H. Science (представлен).
Хан, Дж. Теллус 26 , 160 (1974).
ADS CAS Статья Google ученый
Коэн Ю. и Гордон Л. И. J. geophys. Res. 84 , 347–354 (1978).
ADS Статья Google ученый
Вайс, Р. Ф. EOS 59 , 1101 (1978).
Google ученый
Льюис, В.М., младший в статье Минеральные циклы в юго-восточных экосистемах (ред. Хауэлл, Ф.Г., Джентри, Дж. Б. и Смит, М. Х.) 833–846 (US ERDA, 1975).
Google ученый
Фельдштейн, Н., Дакворт, С., Уолерс, Х. К. и Лински, Б. Загрязнение воздуха. Контрольная задница. J. 13 , 542–545 (1963).
CAS Статья Google ученый
Fritschen, L. et al. USDA Forest Service Res. Пап. PNW-97 (1970).
Evans, L. F., Weeks, I. A., Eccleston, A. J. & Packham, D. R. Envir. Sci. Technol. 11 , 896–900 (1977).
ADS CAS Статья Google ученый
JPM | Бесплатный полнотекстовый | Скрининг симптомов настроения с использованием шкал MMPI-2-RF: применение методов машинного обучения
1. Введение
Миннесотский многофазный опросник личности-2 (MMPI-2) был разработан для выявления и диагностики часто встречающихся психических расстройств.MMPI-2 — это наиболее широко используемый инструмент при проверке персонала на профессии, требующие соответствующей психологической координации и ответственности, такие как полицейские, пожарные, авиадиспетчеры и бортпроводники [1,2,3,4,5,6] . Причиной широкого использования MMPI-2 в обзоре персонала является его относительно простое управление, объективные процедуры оценки и интерпретации, а также шкалы достоверности клинически значимого симптоматического поведения, полученные от различных популяций [7].Таким образом, MMPI-2 был предметом различных исследований валидности и имеет то преимущество, что он может использовать шкалы валидности для выявления предвзятости ответа не только в психиатрии, но также в судебно-медицинской экспертизе и ежедневных скрининговых тестах [8]. Кроме того, использование MMPI-2 в дифференциальной диагностике психических расстройств способствует получению крупномасштабных основанных на исследованиях доказательств его достоверности [9]. Расстройства настроения, включая большое депрессивное расстройство (БДР) и биполярное расстройство, являются одними из самых распространенных. общие психические расстройства [10].Они вызывают социальную дисфункцию из-за частых рецидивов и представляют собой основные причины самоубийств [11,12,13]. Многие люди, страдающие расстройствами настроения, неоднократно обращаются за помощью, не получив точного диагноза. Среди лиц с низким доходом пациенты с расстройствами настроения проходят обследование в среднем восемь врачей, прежде чем им будет поставлен правильный диагноз [14]. Более того, симптомы начались как минимум за 10 лет до того, как у среднего пациента было диагностировано расстройство настроения [15]. Поскольку первичная медико-санитарная помощь выявляет только 30–50% расстройств настроения, пациенты с этими расстройствами часто остаются без лечения [16,17,18,19,20], что может привести к пагубным последствиям, таким как нестабильность или ухудшение настроения, и даже к самоубийству [19 , 21].Профилактика аффективных расстройств возможна путем раннего скрининга и вмешательства [22,23,24,25]; поэтому точный диагноз расстройств настроения имеет жизненно важное значение для обеспечения надлежащего лечения [26,27,28,29]. Многие исследования продемонстрировали, что ранняя диагностика и лечение расстройств настроения значительно улучшает результаты [30,31,32], а эффективные инструменты скрининга позволяют как поставщикам психиатрических услуг, так и исследователям выявлять и помогать тем, кто с наибольшей вероятностью получит пользу от полного психиатрического обследования.Это также может помочь оптимизировать ресурсы для лечения. Однако раннее выявление аффективных расстройств также влечет за собой необходимость различать депрессивные и биполярные расстройства. Раннее выявление пациентов с биполярным расстройством затруднено, поскольку они проводят гораздо больше времени в депрессивной фазе, чем в маниакальной или гипоманиакальной фазе [33]. Люди с биполярным расстройством с большей вероятностью будут обращаться за помощью при депрессии, чем при гипомании или мании, потому что симптомы первого, как правило, более тревожны [20].Эта тенденция может привести к ошибочной диагностике биполярного расстройства как депрессивного расстройства. Такой неправильный диагноз и последующее неправильное лечение (например, маниакальное переключение, вызванное антидепрессантами) могут привести к пагубным последствиям, таким как повышенный риск суицида и нестабильность настроения [19,21]. Эти результаты отражают симптомы депрессивного расстройства, поскольку депрессия часто также влечет за собой большие личные страдания, повышенный риск самоубийства и социальную дисфункцию [14,34,35,36,37,38,39]. Поздняя диагностика этих расстройств настроения может ухудшить состояние прогноз [40].Поскольку варианты лечения расстройств настроения в настоящее время доступны в учреждениях первичной медико-санитарной помощи, но редко используются своевременно из-за поздней диагностики, срочно необходимы новые стратегии для улучшения выявления нарушений настроения в учреждениях первичной медико-санитарной помощи [41]. Поскольку точный диагноз расстройств настроения важен для обеспечения адекватного лечения, а ранняя диагностика и лечение дают гораздо лучшие результаты [30,31,32], эффективные инструменты скрининга, такие как полное психиатрическое обследование, могут принести пользу как поставщикам психиатрических услуг, так и исследователям [26 , 27,28,29].Эффективные инструменты скрининга могут выявить и помочь тем, кто больше всего нуждается в лечении, а также оптимизировать лечебные ресурсы. Однако, несмотря на признание важности ранней диагностики, диагноз все еще остается неясным. Более того, несмотря на значительный прогресс в клинической психологии и психиатрии за последние 100 лет [42,43,44], прогноз все еще остается неопределенным [45]. В психиатрии исследования машинного обучения (ML) проводились более 20 лет [46], и достижения в области алгоритмов и вычислительной мощности за последнее десятилетие позволили провести еще более точные исследования.Машинное обучение полезно при анализе нескольких предикторов, особенно когда есть нелинейные наблюдения и условия взаимодействия, которые трудно концептуализировать теоретически и моделировать на практике. Одно датское исследование использовало ML для определения предикторов суицида с использованием наборов данных пациентов из национальных медицинских регистров [47]. Это исследование подчеркивает важность психических заболеваний как фактора риска самоубийства и показывает, что модели прогнозирования на основе машинного обучения могут повысить точность и полезность инструментов, разработанных для конкретных диагностических групп.Прогностические модели на основе машинного обучения становятся все более популярными из-за их способности объединять большие объемы данных в единую модель и их самооценки прогностической ценности для ранее невидимых пациентов. В частности, исследователи успешно использовали методы ML для прогнозирования стойкости, продолжительности и тяжести большого депрессивного расстройства [48], а также реакции на лечение [49], попыток самоубийства [50] и первого начала серьезных депрессивных эпизодов у солдат США. [51,52]. Методы ML особенно полезны в тех областях, где оценка сложна, требует много времени и дорого, например, когда требуется дифференциальный диагноз из-за неясности первоначального диагноза [53].В этом исследовании мы изучаем эффективность MMPI-2 в скрининге расстройств настроения и возможность его улучшения с помощью методов машинного обучения с прогностической эффективностью.4. Обсуждение
В этом исследовании мы оценили эффективность MMPI-2 при скрининге симптомов расстройства настроения. Инструмент показал высокую точность как для депрессивных, так и для гипоманиакальных симптомов (87,3–88,5%) при использовании методов ML, а AUC составила 0,634–0,840, что указывает на превосходную прогностическую диагностику.
MMPI-2-RF состоит из 50 шкал, включая 10 шкал RC, которые учитывают ограничения клинической шкалы MMPI-2, и имеет на 229 пунктов меньше, чем MMPI-2.Шкала RC значительно улучшила дискриминационную валидность по сравнению с исходной клинической шкалой. Среди них исследователи изучили RCd и RC9 для более точного измерения симптомов настроения [74,75]. Как правило, шкала RCd измеряет депрессивные симптомы, а шкала RC9 — симптомы гипомании. Шкалы RCd и RC9 предсказывают депрессивные и гипоманиакальные симптомы аффективных расстройств с высоким показателем AUC и чувствительности соответственно (RCd = 81% AUC, чувствительность 90,43; RC9 = 70% AUC, 88.83). В этом исследовании мы использовали методы ML, чтобы изучить взаимосвязь между этими шкалами RC и симптомами настроения. По сравнению с RCd MMPI-2-RF (AUC = 0,81), анализ на основе ML дал более точные прогностические значения, за исключением KNN (KNN = 77%, LDA = 74%, RF = 83%). В случае гипоманиакальных симптомов при анализе пунктов RC9 (AUC = 0,70) методы ML показали лучшие результаты по сравнению с традиционными статистическими методами, за исключением снова KNN (KNN = 63%, LDA = 77%, RF = 73%). ).Это означает, что анализ на основе машинного обучения может облегчить более сложную клиническую интерпретацию MMPI-2, чем анализ с использованием существующих клинических шкал или шкал содержания и пар шкал. Алгоритмы машинного обучения разработаны для максимизации клинической значимости и обобщаемости и хорошо оснащены для обработки большого количества переменных в качестве потенциальных предикторов [76]. Здесь, используя методы ML, мы оценили прогностическую ценность скрининга, который был проанализирован с помощью RCd и PHQ по шкале MMPI-2-RF для депрессивных симптомов среди расстройств настроения и с помощью RC9 и MDQ для гипоманиакальных симптомов.Внедрение ML в статистический анализ психиатрических исследований представляет собой сдвиг парадигмы, выходящий за рамки простого добавления аналитических инструментов для объединения и изучения более крупных наборов данных [77]. В течение многих лет классические статистические подходы использовались для подтверждения или опровержения определенных гипотез, но современные исследования машинного обучения фокусируются на общей предсказательной способности моделей, особенно на том, насколько точно они предсказывают желаемые результаты в новых и неизвестных наборах данных. Исследования в этой области в первую очередь оцениваются по их потенциальному клиническому воздействию и по тому, могут ли они предоставить надежную информацию о прогнозе для будущих пациентов (особенно когда пациенты не проходят обследование и не диагностируются в течение многих лет), что приводит к лечению и вмешательствам [49].Это будет полезный метод прогнозирования устойчивых к обнаружению аффективных расстройств. Преимущество использования MMPI-2-RF в качестве инструмента скрининга аффективных расстройств, как это выполнено в этом исследовании, заключается в том, что это может быть более эффективным методом сбора различных клинических данных. одновременно [9]. Кроме того, выполнение MMPI-2-RF на компьютере занимает менее 30 минут, что более эффективно, чем неструктурированные интервью и некоторые другие инструменты самоотчета. Это верно даже с учетом того, что наиболее широко используемый инструмент скрининга биполярного расстройства, MDQ, не может адекватно дифференцировать биполярное расстройство и пограничное расстройство личности [78].В отличие от большинства других измерительных инструментов, MMPI-2-RF может повысить диагностическую надежность за счет включения шкалы эффективности для выявления неполного или завышенного представления психиатрических симптомов. MMPI-2 также может быть полезен для дифференциальной диагностики клинических пациентов с расстройствами настроения. Пять шкал MMPI-2-RF показали значительные различия между пациентами с диагнозом BD и пациентами с MDD. Шкала активации (ACT) имела самую большую AUC (0,74) и эффективно различала пациентов с BD и MDD.В целом, 71% пациентов были правильно классифицированы по шкале ACT, и 72% пациентов, в настоящее время испытывающих депрессию, были правильно классифицированы. Это превосходит уровень классификации 66%, обнаруженный в предыдущем исследовании SAD-P с использованием инструмента, отличного от MMPI-2-RF [79]; кроме того, поскольку при биполярном расстройстве в качестве общего диагностического критерия используется большой депрессивный эпизод, его можно сравнить с большим депрессивным расстройством. Поскольку распознавание аффективных расстройств имеет важное значение, различительная способность шкалы MMPI-2-RF свидетельствует о ее силе в качестве инструмента измерения.В этом исследовании изучали применение MMPI-2-RF в качестве инструмента скрининга, демонстрируя, что существующие RCd и RC9 также составляют значительную AUC (0,807 и 0,704 соответственно).Это исследование имеет несколько ограничений. Во-первых, в исследовании, использующем результаты обследований состояния здоровья студентов, отсутствуют клинические диагнозы. Золотым стандартом является анализ диагнозов с использованием структурированных интервью или клинических оценок, но мы использовали результаты PHQ-9 и MDQ. Оценка симптомов проводилась по шкале; даже если оценки совпадают, это не означает, что у них одинаковые симптомы.В будущих исследованиях может быть полезно разделить группы симптомов на подклассы и проанализировать особенности симптомов. Однако в качестве инструмента для выявления симптомов расстройства настроения наше исследование все же указывает на целесообразность применения этой меры. Во-вторых, не было информации об истории болезни участников. В-третьих, наша выборка студентов из одного университета может не представлять все население. Однако, привлекая достаточно большое количество участников, мы утверждаем, что существует определенная степень обобщаемости по отношению к контингенту студентов колледжа.В-четвертых, хотя методы машинного обучения, используемые в этом исследовании, имеют высокие AUC и чувствительность, они демонстрируют низкую специфичность, поэтому в будущих исследованиях теоретические выводы или инструменты для лечения расстройств настроения с высокими значениями должны быть проверены. Кроме того, в будущих исследованиях используется статистическая сила этой статьи, чтобы рекомендовать эмпирические исследования, которые включают две подгруппы для скрининга расстройств настроения (например, здоровые люди по сравнению с людьми с клиническим диагнозом аффективного расстройства).Кроме того, с помощью других методов машинного обучения (например, методов машинного обучения без учителя, обучения с подкреплением) будущие исследования могут показать, какие функции были важны на основе методов машинного обучения при расстройствах настроения.
В этом исследовании мы определили надежность теста с использованием шкалы RC MMPI-2-RF. Преимущество теста самоотчетов состоит в том, что может быть легче сообщить об эмоциональных трудностях по сравнению с собеседованием, но трудно обеспечить надежность. Это исследование смогло обоснованно гарантировать надежность за счет использования клинически надежной оценки MMPI-2-RF.MMPI-2 широко используется на сайтах отбора и собеседования, и анализ с использованием методов машинного обучения предполагает целесообразность его использования для скрининга групп высокого риска, а также для существующих клинических показателей и показателей содержания. Кроме того, поскольку можно идентифицировать эмоциональные состояния, не спрашивая напрямую об эмоциональных трудностях, это будет полезно при скрининге клинических симптомов в неклинических учреждениях (например, скрининговые тесты). В дополнение к существующим методам интерпретации MMPI, используемым в клинической области, методы машинного обучения, основанные на прогнозировании, могут помочь в выявлении расстройств настроения.
Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.
Настройка вашего браузера для приема файлов cookie
Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:
- В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
- Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
- Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
- Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
- Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.
Почему этому сайту требуются файлы cookie?
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.
Что сохраняется в файле cookie?
Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.
Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.
Систематический обзор биомаркеров сыворотки Антициклический цитруллинированный пептид и ревматоидный фактор как тесты на ревматоидный артрит
В этом систематическом обзоре оценивается текущее состояние антициклических препаратов. цитруллинированный пептид (анти-ЦЦП) и ревматоидный фактор (РФ) в диагностика и прогноз ревматоидного артрита (РА). Мы рассмотрели публикации по тестам и биомаркерам для ранней диагностики РА от Англоязычные журналы, проиндексированные в MEDLINE и не проиндексированные в MEDLINE. источники.Было выявлено и проанализировано 85 публикаций, в том числе 68 исследования из MEDLINE и 17 источников, не относящихся к MEDLINE. Анализы анти-CCP2 обеспечивают улучшенную чувствительность по сравнению с анализами анти-ЦЦП и РФ, но Анализы на анти-CCP2 и RF в комбинации демонстрируют положительный прогнозируемая ценность (PPV) приближается к 100%, что выше, чем PPV любого из одни тесты. Комбинация также может различать пациентов, чье течение болезни ожидается более серьезные, и оба теста включены в 2010 ACR Rheumatoid Критерии классификации артрита.Хотя клиническое значение установлены тесты анти-ЦК, различия в пороговых значениях, чувствительность и специфичность существуют между первым, вторым и В настоящее время проводятся испытания третьего поколения и усилия по согласованию. Анти-ЦЦП и РФ являются клинически ценными биомаркерами для диагностики. и прогноз пациентов с РА. Комбинация двух биомаркеров в сочетании с другими клиническими мерами является важным инструментом для диагностика и ведение пациентов с РА.
1. Введение
Ревматоидный артрит (РА), наиболее часто встречающаяся форма воспалительного полиартрита, распространен примерно у 0,8% взрослых во всем мире [1]. Примерно 1,3 миллиона взрослых в США был диагностирован РА [2]. При отсутствии лечения 20–30% пациентов с РА становятся настолько истощенными в течение первых трех лет после первоначального диагноза, что становятся навсегда инвалидами [1].
За последнее десятилетие возможности лечения пациентов с РА значительно улучшились.Акцент в лечении сместился на раннее вмешательство с агрессивным лечением, направленным на подавление воспаления и предотвращение дальнейшего повреждения суставов [3]. Недавние данные показывают, что раннее введение терапии метотрексатом (МТ) у пациентов с недифференцированным артритом (НС), серопозитивных по анти-ЦЦП, задерживает дифференцировку до РА и замедляет прогрессирование деструкции суставов [4]. Однако начало лечения без подтвержденного диагноза РА нецелесообразно по крайней мере для половины пациентов с UA [5], поскольку методы лечения потенциально токсичны и дороги.
Переходу к более раннему агрессивному лечению будут способствовать более чувствительные и специфические ранние диагностические тесты. Однако это остается сложной задачей, учитывая ограниченность современных диагностических инструментов и методов вмешательства [6]. Клинические данные, лабораторные тесты и методы визуализации используются для диагностики пациентов с подозрением на РА [5, 7, 8]. Однако клинические обследования часто не позволяют идентифицировать пациентов с ранним РА, отчасти из-за неоднородности проявления и течения заболевания [5].Систематический обзор публикаций, оценивающих эффективность клинических критериев ACR 1987 г., показал, что чувствительность к раннему РА составляет от 77% до 80%, а специфичность — от 33% до 77% на основе объединенных данных [9]. Рисунок 1 суммирует патогенез РА и используемые в настоящее время диагностические инструменты.
Течение болезни у пациентов с подтвержденным диагнозом РА может существенно различаться. В некоторых случаях прогрессирование заболевания может быть медленным, а общее воздействие болезни довольно слабым, оставаясь преимущественно локальным заболеванием.Однако у других пациентов прогрессирование заболевания может быть довольно агрессивным со значительной эрозией суставов и системным воздействием [6, 10]. Точная прогностическая информация будет полезна для определения соответствующего курса лечения для этих различных групп пациентов и улучшения результатов лечения.
Чтобы удовлетворить потребность в улучшенных диагностических и прогностических тестах и алгоритмах, проводится оценка различных биомаркеров сыворотки для улучшения диагностики и прогноза РА, включая широкий спектр аутоантител.Однако только ревматоидный фактор (RF) и антициклический цитруллинированный пептид (анти-CCP) получили широкое распространение. Мы систематически изучили литературу, относящуюся к диагностике и прогнозу РА, чтобы оценить текущий статус этих двух аутоантител в качестве диагностических и прогностических тестов для РА.
2. Методы
Мы просмотрели публикации, проиндексированные в MEDLINE, используя стратегии поиска, которые включали ключевые слова «ревматоидный артрит» и одно из следующих: (1) диагностика * ИЛИ мониторинг * ИЛИ идентификация * ИЛИ обнаружение *, (2) биомаркер * ИЛИ циркулирующая ИЛИ сыворотка, и (3) рекомендации * ИЛИ практическая схема * ИЛИ схема лечения *.Мы также искали ключевое слово «anti-CCP» как уникальный критерий поиска. Ограничения для этих поисков включали: Поле: Заголовок / Аннотация, Ограничения: опубликовано с августа 2003 г. по март 2010 г., только элементы с рефератами, люди, английский, испанский. Поиск соответствующих руководств включал следующие ограничения: опубликованные за последние 10 лет, только статьи с рефератами, люди, английский, испанский. В результате поиска было найдено 551 публикация.
Все 551 реферат были тщательно проанализированы для выявления статей, оценивающих характеристики, эффективность и клиническую применимость тестов против ЦЦП и РФ для использования в диагностике РА.С учетом применяемых широких критериев поиска, предназначенных для захвата как можно большего количества релевантных публикаций, в общей сложности 483 реферата были исключены на основе категорий исключения, перечисленных на Рисунке 2. Всего было извлечено 68 публикаций, проиндексированных MEDLINE в полном тексте.
Мы также провели поиск в «серой» литературе (материал, на который можно ссылаться, но который не опубликован в рецензируемых медицинских журналах, индексируемых MEDLINE), на предмет информации, относящейся к анти-ЦЦП и РФ для использования в диагностике РА. .Мы провели поиск в поисковой системе Google, используя ключевые слова, используемые в поиске в MEDLINE. Кроме того, был проведен поиск руководств по диагностике РА на веб-сайте Национального центра обмена информацией. Поиск по тезисам 7-й ежегодной конференции Американского колледжа ревматологов и Ежегодного конгресса Европейской лиги против ревматизма (EULAR) 2008 также проводился с использованием ключевых слов. Для дальнейшего изучения было отобрано пятьдесят пять публикаций, имеющих отношение к цели исследования.
Первичные исследовательские статьи из поиска статей, проиндексированных MEDLINE, которые были включены в этот документ, были оценены на предмет качества доказательств, представленных с использованием Оксфордской рейтинговой системы, определенной Центром доказательной медицины (CEBM). Оксфордские рейтинги определяют пять уровней доказательности, причем уровень 1 является наивысшим уровнем качества, а уровень 5 — наименьшим. Исследования уровня 1 могут использоваться для поддержки высшей степени А рекомендаций клинической практики, исследования уровня 2 и 3 поддерживают рекомендации степени В, в то время как исследования уровня 4 и уровня 5 могут поддерживать рекомендации степени С и степени D, соответственно [11] (см. Таблица 1).
3. РезультатыМы нашли 68 статей из MEDLINE, относящихся к текущим диагностическим рекомендациям и практикам для РА, а также к анти-ЦЦП и РФ как диагностическим тестам для РА. Источники, не относящиеся к MEDLINE, состоящие из текущих практических рекомендаций и тезисов конференций, привели к дополнительным 17 статьям, в общей сложности 85 публикаций, рассмотренных для этого исследования (см. Рисунок 2). Из публикаций MEDLINE 48 были оценены по качеству доказательств с использованием диагностических критериев Оксфордской рейтинговой системы, одна была оценена с использованием прогностических критериев Оксфордской рейтинговой системы, шесть были оценены с использованием как диагностических, так и прогностических критериев, а 13 статей были несистематическими. обзор статей, к которым не применялись рейтинги. Из 54 оцененных диагностических публикаций 37 соответствовали требованиям к качеству доказательств 1-го уровня, которые могли бы поддержать рекомендации степени А.Три публикации соответствуют требованиям уровня 2 и могут поддерживать рекомендации уровня B, а остальные 14 соответствуют требованиям уровня 4 и могут поддерживать рекомендации уровня C. Из прогностических публикаций четыре соответствовали требованиям для уровня 1, две — для уровня 2 и одна — для уровня 4. В целом диагностические исследования смогли соответствовать очень высокому уровню качества доказательств, учитывая наличие критериев классификации ACR RA. в качестве подходящего эталонного стандарта и высокий уровень специфичности тестов против ЦЦП.Для прогностических исследований требованием к уровню 1 является проспективное когортное исследование с хорошим последующим наблюдением, стандарт, которому удалось удовлетворить большинство исследований [11]. 3.1. Патология цитруллинированных белков и аутоантител в RAПосттрансляционная модификация аминокислоты аргинина в аминокислоту цитруллин — это естественный процесс, опосредованный ферментами протеин-аргинилдезаминаза (PAD) [12, 13]. В настоящее время считается, что цитруллинирование участвует в дифференцировка клеток и запрограммированная гибель клеток или апоптоз [12].Природные мишени PAD, идентифицированные к настоящему времени, являются важными структурными белками [12], и цитруллинирование, по-видимому, маркирует эти белки для деградации [12, 14]. После гибели клеток цитруллинированные белки попадают в кровоток [15]. Ван Венроой и его коллеги предположили, что при РА триггерное событие приводит к миграции воспалительных клеток в суставы и активирует ферменты PAD, стимулируя апоптоз суставных клеток. Для подавляющего большинства людей цитруллинированные белки выводятся нормально; однако у 1% пациентов с генетической предрасположенностью цитруллинированные белки не выводятся должным образом и не вызывают выработку аутоантител, которые, в свою очередь, вызывают воспалительную реакцию [15].В воспаленной синовиальной ткани при РА был идентифицирован ряд видов цитруллинированных белков, включая виментин, -енолазу и — и -цепи фибрина [12]. На сегодняшний день в сыворотках пациентов с РА идентифицировано более 100 видов аутоантител, распознающих цитруллинированные белки [16]. 3.2. Тесты на антицитруллинированные белковые антигены (ACPA)Мы нашли 38 первичных исследований, в которых оценивали тесты на ACPA. Из них 18 использовали дизайн когортного исследования, который подтвердил результаты теста ACPA в определенной популяции пациентов, а 20 были исследованиями случай-контроль, в которых сравнивались результаты ACPA у пациентов с РА по сравнению с контрольными популяциями.Тридцать из этих исследований соответствовали стандартам доказательств уровня 1, а восемь исследований случай-контроль отвечали только требованиям уровня доказательности 4. Учитывая взаимосвязь между цитруллинированными белками и RA, аутоантитела, распознающие цитруллинированные белки, являются привлекательными биомаркерами RA, и тесты для измерения этих аутоантител разрабатывались в течение последних двух десятилетий [17–20]. Было обнаружено, что первый из этих тестов, называемый антиперинуклеарным фактором (APF) и антикератиновыми антителами (AKA), измеряет антитела в сыворотке пациентов с РА, которые распознают цитруллинированный белок филаггрин [17–20].Хотя эти тесты не имеют физиологического значения, учитывая, что цитруллинированный филлигрин не продуцируется в синовиальных суставах, тем не менее, эти тесты оказались полезными для идентификации пациентов с РА [12, 19]. Стремясь повысить производительность тестов, Schellekens et al. разработали синтетические линейные пептиды на основе филаггрина для использования в качестве антигена в сывороточных тестах на РА [17, 21]. Распознавание антител было дополнительно улучшено за счет разработки циклических пептидов, делающих фрагмент цитруллина более доступным для сывороточных антител; эти тесты были названы тестами на антициклический цитруллинированный белок или тестами на анти-ЦЦП [17, 21].В тестах против CCP второго и третьего поколения используются комбинации синтетических циклических цитруллинированных пептидов, выбранных в процессе скрининга, для повышения чувствительности по сравнению с анти-CCP1 при сохранении специфичности [17, 22]. В таблице 2 представлена сводка тестов первого, второго и третьего поколения против ЦЦП, выявленных в этом обзоре литературы.
Недавно Пруейн и его коллеги сравнили опубликованные результаты тестов чувствительности к CCP2, анти-CCP3 и анти-MCV в сравнительных исследованиях с использованием одинаковых значений специфичности для трех биомаркеров. Чувствительность тестов против CCP2 была равной или лучше, чем у тестов против CCP3 и против MCV во всех исследованиях [24, 35, 56, 59–64]. Был разработан ряд тестов, которые измеряют присутствие сывороточных антител, распознающих специфические цитруллинированные белки, для использования в качестве биомаркеров RA. В частности, аутоантитела против виментина (называемых анти-MCV и анти-SA) и -енолазы привлекли интерес для применения в тестировании на РА [23, 45, 65–72]. Также разрабатываются анализы на RA, распознающие антитела против модифицированных цитруллинированных пептидов, таких как химерный фибрин / филаггрин [73]. 3.3. Гармонизация тестов против CCPУчитывая, что все три поколения тестов против CCP, а также другие тесты ACPA в настоящее время доступны на коммерческой основе, растет признание того, что результаты этих тестов не совпадают в разных лабораториях и что согласованность результатов теста ACPA [35, 63, 74].Несколько авторов обсуждали важные трудности при сравнении результатов тестов ACPA, включая различия в значениях отсечения, необходимость в общем справочном материале и необходимость включения нецитруллинированных антигенов в тесты ACPA для контроля неспецифического связывания ACPA с остатками аргинина [35, 63, 74–76]. Таблица 2 подчеркивает необходимость гармонизации тестов против CCP, демонстрируя огромные различия в значениях отсечки и рабочих характеристиках тестов против CCP первого, второго и третьего поколений. Среди текущих усилий по гармонизации тестов ACPA — разработка международных эталонных реагентов Центрами по контролю и профилактике заболеваний [63] и Комитетом по стандартизации аутоантител IUIS [74], а также создание банка сывороток пациентов с РА. и другие ревматические заболевания европейским консорциумом AutoCure для использования в диагностических сравнениях тестов [63]. 3.4. Анти-CCP как инструмент прогнозирования RAМы определили шесть основных исследовательских статей, в которых тесты анти-CCP оценивались как инструменты прогнозирования RA.Из них три были когортными исследованиями, два исследования методом случай-контроль и одно представляло собой систематический обзор литературы по борьбе с КПК. Четыре исследования соответствовали критериям доказательств уровня 1, одно соответствовало требованиям уровня 2 и одно соответствовало критериям доказательств уровня 4. Анти-ЦЦП присутствует в сыворотке крови части пациентов с РА и был обнаружен в сыворотке крови пациентов на всех стадиях РА: доклинической, ранней и установленной. В клинических исследованиях антитела к ЦЦП были обнаружены у 55–69% пациентов с РА, [65, 77], у 65% пациентов с РА с поздним началом [78] и у 10% пациентов с ювенильным началом. артрит [77].Исследования банков крови выявили антитела к ЦЦП в сыворотке крови пациентов за 12–14 лет до развития РА [79–82]. В этих исследованиях 34–40% пациентов с РА имели результаты анти-CCP + до начала заболевания [79–82]. Продолжительность времени, в течение которого антитела против CCP обнаруживаются в сыворотке крови пациента до начала заболевания, по-видимому, зависит от возраста. Сывороточные анти-CCP обнаруживаются в сыворотке пожилых пациентов задолго до развития клинических симптомов, тогда как у более молодых пациентов обнаружение сывороточных анти-CCP происходит ближе ко времени начала заболевания [83]. У пациентов с UA сыворотка анти-CCP + может указывать на риск развития РА [27]. Одно исследование пациентов с UA с сывороткой против CCP2 + показало отношение шансов (OR) 25 [12, 84]. Разница между пациентами, у которых вырабатываются антитела против CCP, и пациентами, у которых их нет, может быть отчасти генетической. Исследование пациентов с UA, которым позже был поставлен диагноз RA, обнаружило важную связь между анти-CCP и генетической предрасположенностью к общему эпитопу (SE) [85]. Наличие анти-CCP было связано с аллелями HLA-DRB1, которые, как известно, несут SE [17, 86, 87].Также было показано, что SE связан с продуцированием антител против ряда цитруллинированных белков, обнаруженных в воспаленной синовиальной ткани, включая виментин и -енолазу [65]. Комбинация сыворотки анти-CCP + и аллеля MHC класса II с SE, по-видимому, связана с повышенным риском развития РА у пациентов, что подтверждается сообщенным OR 66,8 для пациентов с комбинацией по сравнению с OR 25,1 для пациентов с антибиотиками. -CCP + только сыворотка [17, 88]. 3.5. Анти-CCP как диагностический инструмент для RAМы выявили 37 первичных исследований, в которых оценивали тесты анти-CCP, из которых 18 использовали дизайн когортного исследования, который проверял тесты против CCP для использования в качестве диагностических инструментов в определенной популяции пациентов, а 19 были Исследования «случай-контроль», сравнивающие результаты анти-ЦЦП у пациентов с РА и контрольной популяции.Двадцать восемь из этих исследований соответствовали стандартам доказательности 1-го уровня, в то время как восемь исследований случай-контроль удовлетворяли только требованиям для доказательности 4-го уровня. Недавние клинические испытания показывают, что анти-CCP очень точны при выборочной идентификации пациентов с РА [39, 89, 90] и особенно полезны в диагностике у пациентов с отрицательным результатом на РФ [90]. Текущие исследования, по-видимому, подтверждают гипотезу о том, что пациенты с РА, положительные или отрицательные по антителам против ЦЦП, могут составлять две подгруппы синдрома РА с разными клиническими проявлениями с течением времени [63].Как показано в Таблице 2, тесты против ЦЦП в целом имеют очень высокую специфичность, но умеренный уровень чувствительности; это согласуется с гипотезой о том, что существуют разные популяции пациентов, которые являются либо анти-CCP-положительными, либо анти-CCP-отрицательными (см. Таблицу 2). Синовиальная ткань от анти-CCP + пациентов экспрессирует более высокие концентрации иммунных цитокинов, имеет большее количество инфильтрирующих лимфоцитов и демонстрирует большую степень разрушения суставов, чем ткань от анти-CCP-отрицательных (анти-CPP-) пациентов [91].Даже в популяциях пациентов с анти-CCP + подгруппы можно дифференцировать по количеству сывороточных антител, распознающих цитруллинированные пептиды и специфические изотипы анти-CCP [67, 92]. Метаанализ 18 исследований анти-CCP показал, что объединенное OR для развития RA, связанного с положительным тестом на анти-CCP2, составляет 16,8, что убедительно свидетельствует о его диагностической ценности [93]. Однако отсутствие анти-ЦЦП диагностически менее полезно, и в случае, если у пациента наблюдается стойкий отек периферических суставов продолжительностью четыре или более недель, отрицательный тест не должен использоваться в качестве причины для отказа.Действительно, низкая отрицательная прогностическая ценность является аргументом, препятствующим тестированию на антитела в сфере первичной медико-санитарной помощи. До недавнего времени установленные руководства не включали анти-ЦЦП в качестве рекомендованного лабораторного теста для диагностики РА [94, 95]. Отсутствие тестов против CCP в руководящих принципах RA было в значительной степени связано с тем фактом, что тесты против CCP текущего поколения были разработаны в течение последних нескольких лет и что их рабочие характеристики все еще изучаются в клинических условиях. Однако в 2007 году Европейская лига против ревматизма (EULAR) рекомендовала, чтобы все пациенты с ранним диагнозом артрита проходили тестирование на наличие анти-CCP [6], а руководство по лечению РА 2008 года, опубликованное Американским колледжем ревматологии (ACR), включает: положительный анти-ЦЦП как один из ряда показателей плохого прогноза пациента, который будет использоваться при выборе лечения [96].За последние три года ACR и EULAR совместно разработали обновленный набор критериев для RA, чтобы заменить устаревшие критерии классификации ACR 1987 года для RA. Новые критерии классификации ревматоидного артрита 2010 года включают наличие антицитруллинированных белковых антител в качестве одного из критериев, который следует использовать при определении того, следует ли диагностировать у пациента РА [97]. В руководстве также упоминается, что ACPA тестируются как анти-CCP [97]. В таблице 3 представлена сводка критериев классификации ревматоидного артрита 2010 года.
3.6. Анти-CCP как инструмент дифференциальной диагностики для RAМы определили четырнадцать основных исследовательских статей, в которых сравнивались результаты тестов на анти-CCP у пациентов с RA и у пациентов с заболеваниями, которые можно спутать с RA. Из них подавляющее большинство (13 из 14) были исследованиями случай-контроль, а два были когортными исследованиями. Семь исследований соответствовали критериям доказательности уровня 1, одно исследование соответствовало критериям уровня 2, а шесть исследований случай-контроль соответствовали критериям уровня 4. РА имеет общие симптомы с другими формами артрита, а также с другими болезненными состояниями [1]. Заболевания, рассматриваемые как часть дифференциального диагноза РА, включают другие заболевания соединительной ткани, включая системную красную волчанку и склеродермию, системные заболевания, такие как инфекционный эндокардит и ревматическая лихорадка, спондилоартропатии, включая псориатический артрит, инфекционный артрит, индуцированный кристаллами артрит или подагру, эндокринопатии. расстройства, синдромы мягких тканей и дегенеративные нарушения, такие как фибромиалгия и полиартикулярный остеоартрит, нарушения отложений, такие как гемохроматоз, и злокачественные новообразования, такие как рак легких и множественная миелома [98]. Помимо того, что они служат одним из нескольких критериев, используемых в текущей классификации РА [97], результаты тестов против ЦЦП также могут предоставить полезную клиническую информацию для дифференциальной диагностики РА [12]. В многочисленных исследованиях сравнивали уровни анти-ЦЦП у пациентов с РА с контрольными группами, состоящими из смешанных ревматических заболеваний, не относящихся к РА (остеоартрит, системная красная волчанка (СКВ) и синдром Шегрена (СС)), спондилоартропатий (псориатический артрит, анкилозирующий спондилит), системных склероз, индуцированный кристаллами артрит, подагра, инфекционный артрит, системный склероз, фибромиалгия и / или другие родственные состояния, а также здоровый контроль [23, 24, 27, 42, 44–46, 51, 54, 72].Для специфичности в диапазоне от 91,5% до 98,8% тесты против ЦЦП показали чувствительность от 60,2% до 83,3% [23, 24, 27, 44–46, 51, 54, 72]. Эти результаты показывают, что, хотя их недостаточно для диагностики РА, как в случае пациентов с отрицательными анти-ЦЦП, наличие повышенных уровней анти-ЦЦП может помочь в дифференциальной диагностике РА и вышеуказанных показаниях. Два клинических исследования, сравнивающих уровни анти-ЦЦП в сыворотках пациентов с РА с уровнями, измеренными в сыворотках небольших образцов пациентов с другими артритическими состояниями, обнаружили, что антитела против ЦЦП отсутствуют в сыворотках пациентов с остеоартритом, ревматической полимиалгией. , кристаллический артрит и постинфекционный полиартрит [48, 99].Хотя антитела против ЦЦП были измерены в сыворотке крови некоторых пациентов с гепатитом С, СКВ, лепрой, ювенильным идиопатическим артритом, псориатическим артритом и СС, тесты на анти-ЦЦП, как было показано, могут дифференцировать РА от этих других состояний [ 15, 85, 99–104]. У пациентов, у которых развился РА или другие формы артрита, включая остеоартрит, СКВ, спондилоартропатию, неопластический синдром и СС, Кудо-Танака и его коллеги обнаружили, что уровни анти-ЦЦП в сыворотке у 18 пациентов с РА постоянно были> 15 Ед / мл. в то время как у 54 пациентов, у которых развились артропатии без РА, было <15 Ед / мл.Единственным исключением были три пациента, у которых были диагностированы артропатии, не относящиеся к РА, но с симптомами до РА, чьи сывороточные уровни анти-ЦЦП были выше 15 Ед / мл [27]. Anti-CCP также обнаруживает ранний RA у пациентов с активным туберкулезом [105]. Для пациентов с СКВ с хроническим деструктивным / деформирующим артритом и пациентов с туберкулезом легких, которые являются анти-ЦЦП-положительными, соотношение анти-ЦЦП и немодифицированного аргининсодержащего пептида (CAP) различается между этими пациентами и пациентами с РА, что позволяет проводить дифференциальную диагностику [ 85, 106–108].Интересно, что в исследовании пациентов с синдромом Дауна более половины пациентов были положительными на анти-ЦЦП; однако ни у одного из пациентов не было клинических признаков артрита, и в настоящее время нет известной связи между анти-CCP-положительными сыворотками у пациентов с синдромом Дауна и РА [101]. 3,7. Анти-CCP как прогностический инструмент для РАМы определили семь основных исследований, оценивающих анти-CCP как прогностический инструмент для RA. Во всех семи исследованиях использовался проспективный когортный дизайн. Четыре исследования соответствовали критериям доказательности уровня 1, два исследования соответствовали критериям уровня 2 и одно исследование соответствовало критериям уровня 4. Анти-ЦЦП коррелирует с различными аспектами РА и может быть мощным предсказателем течения болезни. ESCISIT рекомендует анти-CCP в качестве одного из нескольких прогностических инструментов для выявления пациентов со стойким и / или эрозивным заболеванием [6]. Несколько исследований продемонстрировали сильную связь между наличием анти-ЦЦП и повреждением суставов с более высокими титрами антител против ЦЦП в сыворотке пациентов с эрозивным РА [10, 47, 48, 50, 77, 109]. Однако одно исследование не смогло показать статистически значимой связи между анти-ЦЦП и эрозивным заболеванием [44].В большом проспективном исследовании пациентов с РА, наблюдавшихся более 10 лет, наличие антител против ЦЦП было наиболее надежным единственным предиктором рентгенологического прогрессирования у пациентов с ранним РА. Для этих пациентов даже низкие или умеренные уровни антител против CCP приводили к OR 2,6 для пациента, у которого развивалось рентгенографическое прогрессирование, в то время как для высоких уровней антител против CCP OR достигало 9,9 [110]. Другие исследования показали, что анти-ЦЦП способны прогнозировать развитие у пациента эрозивного заболевания и деформации кисти [10, 12, 40, 90, 111, 112].Наличие анти-ЦЦП при диагностике также позволяет прогнозировать более высокие уровни активности заболевания, измеряемые количеством опухших суставов, DAS28 и другими клиническими показателями [113]. Исследования показали, что анти-CCP в сочетании с другими биомаркерами могут обеспечить еще большую прогностическую силу. Сывороточные антитела к ЦЦП у пациентов с общим эпитопом связаны с худшим радиологическим исходом [36]. Риск тяжелого заболевания был значительно выше у пациентов с анти-CCP +, несущих один или два аллеля HLA-DRB1 с SE [85, 114].Средняя ожидаемая продолжительность радиологического прогрессирования была в 10 раз выше у пациентов с комбинированным присутствием антител против CCP2, RF и SE, чем у пациентов, у которых отсутствовали эти три биомаркера [115, 116]. Степень активности заболевания более точно определялась с помощью комбинированных тестов на наличие антител против CCP и аллелей HLA-DR-B1 * 04 с SE [115]. 3.8. Ревматоидный факторRF, антитело, распознающее Fc или консервативную часть человеческих антител [117], присутствует у 60–90% пациентов с РА с установленным РА [8, 118], но менее чем у 50% пациентов с ранним РА. РА [118].От трех до пяти процентов здоровых взрослых имеют сывороточный РФ; у пожилых этот показатель увеличивается до 10–30% [12, 119]. Все формы RF IgA, IgG и IgM были идентифицированы у пациентов с РА, а также панспецифические и Ga-специфические формы IgM RF [34, 69, 120, 121]. Три изотипа появляются в разное время доклинически, причем IgM-RF присутствуют дальше всего до постановки диагноза (3,8 года), за ним следуют IgA-RF (3,2 года) и IgG RF (0,9 года) [122]. RF более признан как биомаркер РА, чем анти-ЦЦП, и был принят в качестве одного из критериев классификации ACR для РА в 1987 году [123].Европейский постоянный комитет по международным клиническим исследованиям, включая терапию (ESCISIT) отмечает, что это один из нескольких прогностических маркеров, используемых для идентификации пациентов с персистирующим и / или эрозивным заболеванием, но не рекомендует РФ в качестве диагностического маркера РА [6], скорее всего, при хотя бы отчасти из-за его ограниченной специфичности. RF также часто встречается при других аутоиммунных заболеваниях, инфекционных заболеваниях и злокачественных новообразованиях, что делает его относительно неспецифическим маркером RA [3, 8]. Считается, что хронически высокие титры RF более специфичны для РА [118], а также являются прогностическим фактором неблагоприятных исходов [94]. 3.9. Анти-CCP и RF для мониторинга лечения RAПольза тестов анти-CCP для мониторинга лечения противоречива, с противоречивыми данными о степени и продолжительности измененных уровней антител к CCP после лечения RA. В некоторых исследованиях уровни антител к ЦЦП имели тенденцию оставаться стабильными у пациентов с РА после лечения или снижались лишь незначительно [79, 85, 124]. В других исследованиях наблюдалось значительное снижение уровней анти-ЦЦП после лечения только у пациентов с длительностью заболевания менее одного года [125, 126].Сообщалось о значительном снижении уровней анти-ЦЦП у пациентов с установленным РА после лечения блокаторами фактора некроза тканей (ФНО) и в группах пациентов с положительными клиническими ответами после лечения инфликсимабом, этанерцептом и адалимумабом [85, 124, 125, 127 –130]. Однако несколько исследований показали, что лечение пациентов с РА ингибиторами TNF- α снижает уровни RF, при этом практически не влияя на уровни анти-CCP [17, 131–133]. Эти противоречивые результаты могут быть частично связаны с различиями в продолжительности болезни субъектов, а также в продолжительности наблюдения [125]. Несколько исследований показали значительные различия в влиянии лечения на уровни РФ и антител к ЦЦП в сыворотке. В исследованиях, показывающих снижение уровней анти-CCP после лечения, это снижение было меньше, чем снижение уровней IgM-RF у пациентов с установленным РА [125]. Было показано, что уровни RF значительно снижаются при лечении инфликсимабом с метотрексатом или без него [131–133], тогда как на уровни антител против CCP не влияет лечение инфликсимабом [132, 133], и они только временно снижаются, прежде чем вернуться к исходным уровням с помощью лечение инфликсимабом и метотрексатом [131].Кроме того, Mikuls et al. обнаружили, что уровни RF прогрессивно снижаются в зависимости от клинического течения заболевания, в то время как уровни анти-ЦЦП снижаются лишь частично в течение первого года болезни и таким образом, который не коррелирует ни с лечением, ни с клиническим течением [17, 126]. В таблице 4 обобщены результаты этих исследований.
Эти различия могут дать информацию о различных эффектах лечебного вмешательства на короткоживущие и долгоживущие плазматические клетки, продуцирующие аутоантитела, на разных стадиях развития заболевания или даже в соответствии с подходом к лечению, но они вряд ли добавят ценность стандартным клинические меры как средство контроля терапевтического ответа.Тем не менее, в недавно опубликованном субанализе объединенных данных двух исследований фазы III биологического ритуксимаба против CD20 при РА, у пациентов, которые были серопозитивными по RF и / или анти-CPP, вероятность достижения ответа ACR была в два-три раза выше. к ритуксимабу, чем серонегативные для обоих аутоантител [134], что предполагает потенциально важную роль обоих биомаркеров в выборе лечения. Эти многообещающие данные предполагают потенциал персонализированных подходов к медицине с использованием биомаркеров РА для определения наиболее подходящего лечения пациентов с РА. 3.10. Анти-ЦЦП и РФ в патологии РАДиагностические и прогностические исследования, сравнивающие антитела против ЦЦП и РФ в одних и тех же образцах пациентов с РА, предполагают, что наличие или отсутствие этих биомаркеров в сыворотках пациентов может определять подгруппы пациентов с потенциально разными исходами (см. Таблицу 5). Кроме того, лечение РА имеет значительно различающиеся эффекты на сывороточные уровни РФ и антител против ЦЦП. Эти результаты привели к гипотезе о том, что RF и анти-CCP являются частью двух отдельных систем антител, представляющих разные, но перекрывающиеся физиологические процессы, причем RF регулируется TNF- α , а анти-CCP — независимо от такой регуляции [17].
Эта гипотеза может будут дополнительно подтверждены исследованиями генетических факторов риска.Идентифицировано несколько генов чувствительности к RA, включая HLA-DRB1 с общим эпитопом (SE) и PTPN22 [150, 151]. Сочетание любого из этих генов предрасположенности к курению, по-видимому, подвергает пациентов значительно более высокому риску развития антител против цитруллинированных белков [150, 152–154]. Интересно, что в то время как HLA-DRB1 SE, PTPN22 и курение были независимыми факторами, связанными с продуцированием антител против цитруллинированных белков с отношением шансов 11.1, только HLA-DRB1 SE и курение были независимыми факторами, связанными с продуцированием RF с гораздо более низким отношением шансов, равным 4,4 [150], что подтверждает гипотезу о том, что эти аутоантитела продуцируются различными патологическими процессами. 3.11. Эффективность тестов против CCP и RFМы выявили восемь основных исследовательских статей, в которых напрямую сравнивали эффективность тестов против CCP и RF, половина из которых были когортными исследованиями, а другая половина — исследованиями «случай-контроль». Шесть первичных исследований соответствовали критериям доказательности уровня 1, а два исследования случай-контроль удовлетворяли критериям уровня 4. Исторически Anti-CCP считалась очень специфичной для RA, но не такой чувствительной, как RF. Объединенные данные метаанализа более 5000 пациентов с РА дают чувствительность теста к RF 62% и специфичность теста 87% [93]. Исследования показали, что специфичность анти-ЦЦП находится в диапазоне 95–96% с чувствительностью 53–58%. [46, 89, 99]. Однако метаанализ 56 исследований показал, что чувствительность анти-CCP2 составляет 68% при специфичности 95%, что позволяет предположить, что на самом деле он может быть более чувствительным, чем РФ [85, 90].Подобный анализ 29 исследований РФ показал, что РФ имеет только чувствительность 60% при специфичности 79% [155, 156]. Абсолютные значения чувствительности и специфичности двух биомаркеров значительно различаются в исследованиях, указанных в этой статье. Частично это связано с исследованиями, в которых использовались разные пороговые значения для анти-CCP и RF, а также разные методологии тестирования и разные производители. Однако в двух исследованиях пороговые значения соответствуют заранее определенной специфичности теста> 98.5% были применены к тестам сыворотки обоих биомаркеров, что позволило провести прямое сравнение чувствительности к анти-ЦЦП и РФ. Результирующая чувствительность составила 73,7–77,7% для анти-CCP и только 7,4–12,8% для РФ [36, 111]. В более позднем исследовании Wild et al. получили аналогичные результаты, когда значение отсечения было установлено на 95% специфичность, при этом анти-ЦЦП выявляли 77% пациентов с РА, в то время как РФ идентифицировал только 62% [157]. Таким образом, анти-ЦЦП, по-видимому, имеет лучшую чувствительность и специфичность, чем РФ. Метаанализ также показал, что анти-ЦЦП имеют более высокие отношения шансов для прогноза развития РА и радиографического прогрессирования, чем РФ, что указывает на то, что анти-ЦЦП может быть лучшим прогностическим инструментом [93]. Однако это не означает, что анти-ЦЦП могут заменить РФ в диагностических и прогностических исследованиях РА. Среди RF-пациентов примерно 20% являются анти-CCP + [17, 158–161]. Среди пациентов с анти-ЦЦП сопоставимые 15–20% являются RF-положительными [17, 162–164]. Сообщается, что примерно у 30% пациентов с РА отсутствуют как анти-ЦЦП, так и РФ [136]. Таким образом, эти два теста, по-видимому, дополняют друг друга, а анти-CCP имеют особую диагностическую ценность для RF-пациентов [79, 109]. В сочетании эти два теста оказываются еще более мощными [109] с положительной прогностической ценностью (PPV), близкой к 100%, что выше, чем PPV любого из тестов по отдельности [17, 99, 165].Также было показано, что наличие как РФ-антител, так и антител против ЦЦП позволяет предсказать, у каких пациентов разовьется РА [17, 166, 167]. Интересно, что Шовман и др. обнаружил самую высокую корреляцию сывороточного RF и анти-CCP у неэрозивных пациентов; однако причина этой корреляции не ясна [50]. Улучшенные диагностические результаты для комбинации анти-ЦЦП и РФ были показаны при измерении РФ с помощью мультиплексного цитофлуориметрического анализа [168]. В таблице 5 приведены характеристики пациентов, положительных и отрицательных по анти-ЦЦП и РФ. 3.12. Алгоритмы прогнозирования РА в разработкеУчитывая ограничения отдельных тестов для прогнозирования развития РА и прогрессирования заболевания, разрабатываются алгоритмы прогнозирования, которые объединяют соответствующие демографические данные пациента с различными критериями тестирования, включая комбинации биомаркеров сыворотки. Комбинации биомаркеров, которые являются многообещающими в качестве будущих диагностических или прогностических панелей для раннего РА, включают анти-CCP, анти-MCV и IgM-RF [66], анти-CCP и матриксные металлопротеиназы 3 (MMP-3) [169] и анти- CCP, MMP-3 и высокочувствительный CRP (hsCRP) [170].Повышенные уровни антител к ЦЦП, ММР-3 и вчСРБ наблюдались доклинически [170]. Комбинация анти-ЦЦП, РФ и СРБ наблюдалась для прогнозирования развития РА [31]; однако другое исследование показало, что анти-CCP сами по себе превосходит любые комбинации с RF, CRP, MMP-3 и антигалактозильными антителами IgG (CARF) в прогнозировании развития RA [27]. Комбинация антител к ЦЦП или другим антицитруллинированным белкам с RF и sE-селектином также продемонстрировала как диагностический, так и прогностический потенциал [171]. 4.ОбсуждениеRF-тесты хорошо зарекомендовали себя в качестве диагностических и прогностических инструментов для РА и были включены в качестве критерия в классификацию ACR пациентов с РА с 1987 года [123]. Недавнее добавление теста ACPA в обновленные критерии классификации РА 2010 ACR является признанием клинической ценности этих биомаркеров для диагностики пациентов с РА [97]. Одних только тестов RF и анти-CCP недостаточно для диагностики РА, поскольку не у всех пациентов с РА есть оба биомаркера, а у некоторых пациентов нет обоих (см. Таблицу 5).Однако в сочетании с другими клиническими показателями два биомаркера вместе предоставляют важную диагностическую и прогностическую информацию о различных популяциях пациентов с РА в зависимости от того, какие из биомаркеров, если таковые имеются, присутствуют в сыворотке крови пациентов (см. Таблицы 3 и 5). За последние 20 лет тесты Anti-CCP претерпели значительные изменения. Начиная с исходных линейных антигенов, используемых для идентификации сывороточных аутоантител против цитруллинированных белков, разработка и уточнение циклических цитруллинированных антигенов привело к улучшению чувствительности теста при сохранении чрезвычайно высоких уровней специфичности [17, 22].Было показано, что тесты на анти-ЦЦП являются более чувствительными и более специфичными в отношении РА, чем РФ [36, 85, 90, 93, 111, 155, 156]. В этой статье выявляется большое количество диагностических исследований, обеспечивающих доказательства уровня 1 клинической ценности тестов против CCP в диагностике РА, подтверждающих валидность тестов против CCP для этого приложения. Было рассмотрено меньшее количество исследований, в которых оценивалась прогностическая ценность тестов против ЦЦП, и они предоставили смешанные уровни доказательств. Учитывая многообещающие на сегодняшний день результаты, согласно которым анти-CCP указывают на более тяжелое течение заболевания, было бы полезно провести дополнительные проспективные продольные исследования с хорошим последующим наблюдением за пациентами, чтобы дополнительно подтвердить прогностическую ценность тестов против CCP. В настоящее время коммерчески доступны три поколения тестов против CCP. Из трех поколений тесты второго поколения в настоящее время обеспечивают лучшую производительность [24, 35, 56, 59–64]. Учитывая разные уровни отсечения, чувствительность и специфичность, растет признание того, что результаты анти-ЦЦП не взаимозаменяемы в разных лабораториях [35, 63, 74]. Постоянная разработка международных эталонных стандартов является критическим элементом в усилиях по гармонизации результатов тестов на анти-КЦП, чтобы сделать интерпретацию этих результатов последовательной и улучшить способность клиницистов принимать решения по ведению пациентов [63, 74]. В заключение, Anti-CCP и RF являются признанными биомаркерами, связанными с RA, которые включены в текущее руководство по классификации ACR для диагностики RA. Рассмотренные исследования показывают, что эти два биомаркера являются многообещающими ранними диагностическими тестами с потенциалом для поддержки раннего агрессивного вмешательства с использованием новых вариантов лечения РА (см. Рисунок 1). Анти-CCP, по-видимому, является сильным предиктором эрозивного РА, что делает его потенциально важным прогностическим инструментом, который можно использовать для принятия обоснованных решений по ведению пациентов.Дополнительные проспективные лонгитюдные исследования прогностической ценности тестов против ЦЦП помогут подтвердить это клиническое применение. Наконец, принятие международных эталонных стандартов значительно улучшит согласованность результатов анти-CCP в разных лабораториях. Очки обучения Ключевые сообщения(i) Доклиническое присутствие анти-ЦЦП делает его важным биомаркером раннего РА.(ii) Анализы против ЦЦП нового поколения обладают высокой специфичностью, а в сочетании с РЧ-тестами — большей чувствительностью.ФинансированиеЭта работа была поддержана Roche Diagnostics, Ltd. Заявления, содержащиеся в этом документе, принадлежат исключительно авторам, и никакое одобрение Roche Diagnostics, Ltd. не должно подразумеваться или подразумеваться. Конфликт интересовДж. Криден, Дж. Гартеманн и Дж. Хси — сотрудники компании Roche Diagnostics. БлагодарностиАвторы с признательностью выражают признательность Леоре Шифф, Талии Фостер и Линдси Халлетт за помощь в подготовке статьи. Эффективный и долговечный электрокатализ восстановления N2 в условиях окружающей среды: наностержни β-FeOOH в качестве катализатора на основе неблагородных металловNH 3 — одно из важнейших химических веществ с широким спектром применения. NH 3 в основном производится по процессу Хабера – Боша , что приводит к большому потреблению энергии и выбросам углерода. Электрохимическое восстановление стало экологически безвредной и устойчивой альтернативой искусственной фиксации N 2 в условиях окружающей среды, но требуются материалы для эффективного катализа реакции восстановления N 2 (NRR).В этом сообщении мы сообщаем, что наностержни β-FeOOH ведут себя как эффективный и долговечный электрокатализатор NRR. В 0,5 М LiClO 4 такой электрокатализатор обеспечивает высокий выход NH 3 , составляющий 23,32 мкг / ч -1 мг кат. -1 и фарадеевская эффективность 6,7%, что превосходит большинство известных электрокатализаторов NRR на водной основе в условиях окружающей среды. Примечательно, что этот катализатор также показывает хорошую электрохимическую стабильность и отличную селективность.Каталитический механизм NRR на поверхности FeOOH (110) дополнительно обсуждается с использованием расчетов по теории функционала плотности. У вас есть доступ к этой статье Подождите, пока мы загрузим ваш контент… Что-то пошло не так. Попробуйте снова?Пептидные ингибиторы инфекционности вируса денге и вируса Западного Нила | Журнал вирусологииWhite SH, Snider C, Jaysinghe S, Kim J: Membrane Protein Explorer, версия 2.2а. http: // blancobiomoluciedu / mpex /. 2003 Google ученый Карр CM, Ким PS: подпружиненный механизм конформационного изменения гемагглютинина гриппа. Клетка. 1993, 73: 823-832. 10.1016 / 0092-8674 (93) -Вт. CAS Статья PubMed Google ученый Уилсон И.А., Скехел Дж. Дж., Уайли, округ Колумбия: Структура гемагглютининового гликопротеина мембраны вируса гриппа при разрешении 3 A.Природа. 1981, 289: 366-373. 10.1038 / 289366a0. CAS Статья PubMed Google ученый Gallaher WR: Подобные структурные модели трансмембранных гликопротеинов вирусов Эбола и птичьей саркомы. Клетка. 1996, 85: 1-2. 10.1016 / S0092-8674 (00) 81248-9. Артикул Google ученый Gallaher WR, Ball JM, Garry RF, Griffin MC, Montelaro RC: Общая модель трансмембранных белков ВИЧ и других ретровирусов.AIDS Res Hum Retroviruses. 1989, 5: 431-440. CAS Статья PubMed Google ученый Wild CT, Shugars DC, Greenwell TK, McDanal CB, Matthews TJ: Пептиды, соответствующие предсказуемому альфа-спиральному домену gp41 вируса иммунодефицита человека типа 1, являются мощными ингибиторами вирусной инфекции. Proc Natl Acad Sci U S. A. 1994, 91: 9770-9774. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый Wild C, Greenwell T, Matthews T: синтетический пептид из gp41 ВИЧ-1 является мощным ингибитором опосредованного вирусом слияния клеток с клетками. Исследования СПИДа и человеческие ретровирусы. 1993, 9: 1051-1053. CAS Статья Google ученый : Ингибиторы слияния ВИЧ. J HIV Ther. 2001, 6: 91-94. CAS PubMed Google ученый Sodroski JG: Ингибиторы проникновения ВИЧ-1 в боковой карман.Клетка. 1999, 99: 243-246. 10.1016 / S0092-8674 (00) 81655-4. CAS Статья PubMed Google ученый Ламберт Д.М., Барни С., Ламберт А.Л., Гатри К., Мединас Р., Дэвис Д.Э., Бьюси Т., Эриксон Дж., Мерутка Г., Петтуэй SRJ: Пептиды из консервативных областей слитых белков парамиксовируса (F) являются мощными ингибиторами вирусного слияния. Proc Natl Acad Sci U S. A. 1996, 93: 2186-2191. 10.1073 / pnas.93.5.2186. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый Янг Дж. К., Ли Д., Абрамовиц М. С., Моррисон Т. Г.: Взаимодействие пептидов с последовательностями из областей гептадных повторов слитого белка вируса болезни Ньюкасла. J Virol. 1999, 73: 5945-5956. PubMed Central CAS PubMed Google ученый Ватанабе С., Такада А., Ватанабе Т., Ито Х, Кида Х, Каваока Ю.: Функциональное значение спиральной спирали гликопротеина вируса Эбола. J Virol. 2000, 74: 10194-10201. 10.1128 / JVI.74.21.10194-10201.2000. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый Bosch BJ, van der Zee R, de Haan CA, Rottier PJ: Спайковый белок коронавируса — это гибридный белок вируса класса I: структурная и функциональная характеристика комплекса слитого ядра. J Virol. 2003, 77: 8801-8811. 10.1128 / JVI.77.16.8801-8811.2003. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый Bultmann H, Brandt CR: Пептиды, содержащие мотивы, передающие мембрану, ингибируют проникновение вируса. J Biol Chem. 2002, 277: 36018-36023. 10.1074 / jbc.M204849200. CAS Статья PubMed Google ученый Маркосян Р.М., Бейтс П., Коэн Ф.С., Меликян ГБ: Исследование индуцированного низким pH рефолдинга Env вируса саркомы птиц и лейкоза в пучок из шести спиралей. Biophys J. 2004, 87: 3291-3298. 10.1529 / biophysj.104.047696. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый Rapaport D, Ovadia M, Shai Y: Синтетический пептид, соответствующий консервативному домену гептадного повтора, является мощным ингибитором слияния вируса Сендай и клетки: возникающее сходство с функциональными доменами других вирусов. Embo J. 1995, 14: 5524-5531. PubMed Central CAS PubMed Google ученый Окадзаки К., Кида Н: синтетический пептид из области гептадного повтора гликопротеина В вируса герпеса ингибирует репликацию вируса.J Gen Virol. 2004, 85: 2131-2137. 10.1099 / vir.0.80051-0. CAS Статья PubMed Google ученый Yao Q, Compans RW: Пептиды, соответствующие последовательности гептадного повтора гибридного белка вируса парагриппа человека, являются мощными ингибиторами вирусной инфекции. Вирусология. 1996, 223: 103-112. 10.1006 / viro.1996.0459. CAS Статья PubMed Google ученый Rey FA, Heinz FX, Mandl C, Kunz C, Harrison SC: гликопротеин оболочки вируса клещевого энцефалита при разрешении 2 A. Природа. 1995, 375: 291-298. 10.1038 / 375291a0. CAS Статья PubMed Google ученый Lescar J, Roussel A, Wien MW, Navaza J, Fuller SD, Wengler G, Rey FA: гликопротеиновая оболочка слияния вируса леса Семлики: икосаэдрическая сборка, предназначенная для фузогенной активации при эндосомальном pH.Клетка. 2001, 105: 137-148. 10.1016 / S0092-8674 (01) 00303-8. CAS Статья PubMed Google ученый Kuhn RJ, Zhang W, Rossmann MG, Pletnev SV, Corver J, Lenches E, Jones CT, Mukhopadhyay S, Chipman PR, Strauss EG, Baker TS, Strauss JH: Структура вируса денге: значение для флавивируса организация, созревание и слияние. Клетка. 2002, 108: 717-725. 10.1016 / S0092-8674 (02) 00660-8. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый Zhang Y, Corver J, Chipman PR, Zhang W, Pletnev SV, Sedlak D, Baker TS, Strauss JH, Kuhn RJ, Rossmann MG: Структуры незрелых флавивирусных частиц. Embo J. 2003, 22: 2604-2613. 10.1093 / emboj / cdg270. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый Bressanelli S, Stiasny K, Allison SL, Stura EA, Duquerroy S, Lescar J, Heinz FX, Rey FA: Структура гликопротеина оболочки флавивируса в его конформации слияния мембран, индуцированной низким pH.Эмбо Дж. 2004, 23: 728-738. 10.1038 / sj.emboj.7600064. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый Modis Y, Ogata S, Clements D, Harrison SC: Структура белка оболочки вируса денге после слияния мембран. Природа. 2004, 427: 313-319. 10.1038 / природа02165. CAS Статья PubMed Google ученый Modis Y, Ogata S, Clements D., Harrison SC: лиганд-связывающий карман в гликопротеине оболочки вируса денге.Proc Natl Acad Sci U S. A. 2003, 100: 6986-6991. 10.1073 / pnas.0832193100. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый Mukhopadhyay S, Kim BS, Chipman PR, Rossmann MG, Kuhn RJ: Структура вируса Западного Нила. Наука. 2003, 302: 248-10.1126 / science.1089316. CAS Статья PubMed Google ученый Mukhopadhyay S, Kuhn RJ, Rossmann MG: Структурная перспектива жизненного цикла флавивирусов.Nat Rev Microbiol. 2005, 3: 13-22. 10.1038 / nrmicro1067. CAS Статья PubMed Google ученый Рей Ф.А.: Структура гликопротеина оболочки вируса денге: новое понимание его взаимодействий во время проникновения вируса. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2003, 100: 6899-6901. 10.1073 / pnas.1332695100. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый ВОЗ: Денге и геморрагическая лихорадка денге. 2002 г., http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs117/en/ Google ученый Хотта Х., Санчес Л.Ф., Такада Х., Хомма М., Котани С.: Усиление инфекции вирусом денге в культивируемых макрофагах мышей липофильными производными мурамиловых пептидов. Microbiol Immunol. 1985, 29: 533-541. CAS Статья PubMed Google ученый Холстед С.Б.: Патогенез денге: проблемы молекулярной биологии. Наука. 1988, 239: 476-481. CAS Статья PubMed Google ученый Guy B, Chanthavanich P, Gimenez S, Sirivichayakul C, Sabchareon A, Begue S, Yoksan S, L Luxembourgger C, Lang J: Оценка с помощью проточной цитометрии антителозависимого усиления (ADE) инфекции денге с помощью сыворотки от тайских детей, иммунизированных живой аттенуированной четырехвалентной вакциной против денге.Вакцина. 2004, 22: 3563-3574. 10.1016 / j.vaccine.2004.03.042. CAS Статья PubMed Google ученый Sabchareon A, Lang J, Chanthavanich P, Yoksan S, Forrat R, Attanath P, Sirivichayakul C, Pengsaa K, Pojjaroen-Anant C, Chokejindachai W, Jagsudee A, Saluzzo JF, Nhamarapraprapra четырехвалентных живых аттенуированных вакцин против денге у взрослых тайских добровольцев: роль концентрации серотипа, соотношения и множественных доз.Am J Trop Med Hyg. 2002, 66: 264-272. PubMed Google ученый Edelman R, Wasserman SS, Bodison SA, Putnak RJ, Eckels KH, Tang D, Kanesa-Thasan N, Vaughn DW, Innis BL, Sun W. Испытание фазы I 16 составов четырехвалентного живого аттенуированного вакцина против денге. Am J Trop Med Hyg. 2003, 69: 48-60. PubMed Google ученый Канеса-Тасан Н., Сан В., Людвиг Г.В., Росси К., Путнак Дж. Р., Мангиафико Дж. А., Иннис Б. Л., Эдельман Р.: Ответы атипичных антител у реципиентов вакцины против денге.Am J Trop Med Hyg. 2003, 69: 32-38. CAS PubMed Google ученый Kanesa-thasan N, Sun W, Kim-Ahn G, Van Albert S, Putnak JR, King A, Raengsakulsrach B, Christ-Schmidt H, Gilson K, Zahradnik JM, Vaughn DW, Innis BL, Saluzzo JF, Hoke CHJ: Безопасность и иммуногенность аттенуированных вакцин против вируса денге (Aventis Pasteur) для людей-добровольцев. Вакцина. 2001, 19: 3179-3188. 10.1016 / S0264-410X (01) 00020-2. CAS Статья PubMed Google ученый Бхамараправати Н., Сути Ю. Живая аттенуированная четырехвалентная вакцина против денге. Вакцина. 2000, 18 Дополнение 2: 44-47. 10.1016 / S0264-410X (00) 00040-2. CAS Статья PubMed Google ученый Барретт А.Д.: Текущее состояние вакцин против флавивируса. Ann N Y Acad Sci. 2001, 951: 262-271. CAS Статья PubMed Google ученый Sun W, Edelman R, Kanesa-Thasan N, Eckels KH, Putnak JR, King AD, Houng HS, Tang D, Scherer JM, Hoke CHJ, Innis BL: вакцинация людей-добровольцев моновалентной и четырехвалентной живой вакциной — аттенуированные вакцины против лихорадки денге.Am J Trop Med Hyg. 2003, 69: 24-31. PubMed Google ученый Guirakhoo F, Pugachev K, Zhang Z, Myers G, Levenbook I, Draper K, Lang J, Ocran S, Mitchell F, Parsons M, Brown N, Brandler S, Fournier C, Barrere B, Rizvi F , Travassos A, Nichols R, Trent D, Monath T: Безопасность и эффективность химерных вакцин против вируса желтой лихорадки и денге у приматов, отличных от человека. J Virol. 2004, 78: 4761-4775. 10.1128 / JVI.78.9.4761-4775.2004. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый Guirakhoo F, Pugachev K, Arroyo J, Miller C, Zhang ZX, Weltzin R, Georgakopoulos K, Catalan J, Ocran S, Draper K, Monath TP: Виремия и иммуногенность у нечеловеческих приматов четырехвалентной желтой лихорадки — химерная вакцина против денге: генетические реконструкции, корректировка дозы и ответы антител против изолятов вируса денге дикого типа.Вирусология. 2002, 298: 146-159. 10.1006 / viro.2002.1462. CAS Статья PubMed Google ученый Wimley WC, White SH: экспериментально определенная шкала гидрофобности для белков на границах раздела мембран. Nat Struct Biol. 1996, 3: 842-848. 10.1038 / нсб1096-842. CAS Статья PubMed Google ученый Giannecchini S, Bonci F, Pistello M, Matteucci D, Sichi O, Rovero P, Bendinelli M: проксимальная к мембране область, богатая триптофаном, в эктодомене трансмембранного гликопротеина вируса иммунодефицита кошек важна для проникновения в клетки.Вирусология. 2004, 320: 156-166. 10.1016 / j.virol.2003.12.001. CAS Статья PubMed Google ученый Гарри Р.Ф., Дэш С.: Вычислительные анализы протеомики предполагают, что гликопротеины оболочки вируса гепатита С E1 и пестивируса E2 представляют собой усеченные слитые белки класса II. Вирусология. 2003, 307: 255-265. 10.1016 / S0042-6822 (02) 00065-Х. CAS Статья PubMed Google ученый Garry CE, Garry RF: Компьютерный анализ протеомики предполагает, что карбоксиконцевые гликопротеины буниавирусов представляют собой слитые вирусные белки класса II (бета-пенетрены). Модель Theor Biol Med. 2004, 1: 10-10.1186 / 1742-4682-1-10. PubMed Central Статья PubMed Google ученый Гиббонс Д.Л., Вани М.С., Руссель А., Вигуру А., Рейли Б., Лепо Дж., Килиан М., Рей Ф.А.: Конформационные изменения и белок-белковые взаимодействия гибридного белка вируса леса Семлики.Природа. 2004, 427: 320-325. 10.1038 / природа02239. CAS Статья PubMed Google ученый Beasley DW, Barrett AD: Идентификация нейтрализующих эпитопов в структурном домене III белка оболочки вируса Западного Нила. J Virol. 2002, 76: 13097-13100. 10.1128 / JVI.76.24.13097-13100.2002. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый Volk DE, Beasley DW, Kallick DA, Holbrook MR, Barrett AD, Gorenstein DG: исследования структуры раствора и связывания антител домена III белка оболочки из штамма вируса Западного Нила из Нью-Йорка. J Biol Chem. 2004, 279: 38755-38761. 10.1074 / jbc.M402385200. CAS Статья PubMed Google ученый Чен Ю., Магуайр Т., Маркс Р.М.: Демонстрация связывания белка оболочки вируса денге с клетками-мишенями.J Virol. 1996, 70: 8765-8772. PubMed Central CAS PubMed Google ученый Bhardwaj S, Holbrook M, Shope RE, Barrett AD, Watowich SJ: Биофизическая характеристика и вектор-специфическая антагонистическая активность домена III белка оболочки клещевого флавивируса. J Virol. 2001, 75: 4002-4007. 10.1128 / JVI.75.8.4002-4007.2001. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый Wu KP, Wu CW, Tsao YP, Kuo TW, Lou YC, Lin CW, Wu SC, Cheng JW: Структурная основа флавивируса, распознаваемого его нейтрализующим антителом: структура раствора домена III белка оболочки вируса японского энцефалита. J Biol Chem. 2003 Google ученый Hung SL, Lee PL, Chen HW, Chen LK, Kao CL, King CC: Анализ этапов проникновения вируса денге в клетки-хозяева. Вирусология. 1999, 257: 156-167.10.1006 / viro.1999.9633. CAS Статья PubMed Google ученый Allison SL, Stiasny K, Stadler K, Mandl CW, Heinz FX: Картирование функциональных элементов в области стержня-якоря белка оболочки E. J вируса клещевого энцефалита. 1999, 73: 5605-5612. PubMed Central CAS PubMed Google ученый Liu S, Xiao G, Chen Y, He Y, Niu J, Escalante CR, Xiong H, Farmar J, Debnath AK, Tien P, Jiang S: взаимодействие между участками 1 и 2 гептадных повторов в шиповом белке коронавируса, ассоциированного с атипичной пневмонией: влияние на механизм слияния вируса и идентификация ингибиторов слияния.Ланцет. 2004, 363: 938-947. 10.1016 / S0140-6736 (04) 15788-7. CAS Статья PubMed Google ученый Сиа С.К., Карр П.А., Кокран А.Г., Малашкевич В.Н., Ким П.С.: короткие ограниченные пептиды, которые ингибируют проникновение ВИЧ-1. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2002, 99: 14664-14669. 10.1073 / pnas.232566599. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый Oliphant T, Engle M, Nybakken GE, Doane C, Johnson S, Huang L, Gorlatov S, Mehlhop E, Marri A, Chung KM, Ebel GD, Kramer LD, Fremont DH, Diamond MS: Разработка гуманизированного моноклонального антитела с терапевтический потенциал против вируса Западного Нила. Nat Med. 2005, 11: 522-30. 10,1038 / нм1240. PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый Куреши Н.М., Кой Д.Х., Гарри РФ, Лос-Анджелес: характеристика предполагаемого клеточного рецептора трансмембранного гликопротеина ВИЧ-1 с использованием синтетических пептидов. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||