Реверсивное движение на дороге: что это, правила 2021
Автомобиль въехал в дерево или оно упало на машину – что делать, кто виноват и считается ли это ДТП?
Читать10 пунктов ПДД, которые водитель должен знать наизусть
ЧитатьПосле ДТП номер помялся, потерялся или некуда его крепить – можно ли ездить без госномера?
Читать6 достоверных фактов, которые помогут иначе взглянуть на УАЗ
ЧитатьКак защитить автомобиль от замерзания? 8 советов от опытных водителей
ЧитатьМогут ли ГИБДД отправить на медосвидетельствование, если увидят в автомобиле кальян, бонг, сигару или самокрутку
ЧитатьКамень из-под колёс автомобиля или при покосе – это ДТП, работает ли ОСАГО, и кто виноват?
ЧитатьНазначили лишение прав – можно ли обжаловать и поменять на административный арест и как?
ЧитатьПроспект Мира в Москве разгрузят с помощью реверсивной полосы :: Общество :: РБК
Как сообщает Центр организации дорожного движения правительства Москвы (ЦОДД), на участке проспекта от Садового до Третьего транспортного кольца (ТТК) уже появилась разметка полосы реверсивного движения, выезжать на которую запрещено до запуска автоматизированной системы управления реверсивным движением.
Окончание работ и официальное открытие реверсивного движения запланированы на начало ноября 2012г.
В связи с этим ЦОДД призывает всех водителей быть предельно бдительными на данном участке дороги, неукоснительно соблюдать правила дорожного движения, в особенности в части запрета выезда на полосу без соответствующих знаков и разрешающего сигнала светофора.
Тем временем Новорязанское шоссе столицы готовится к реконструкции, которая будет проведена до конца 2014г., сообщает Комплекс градостроительной политики и строительства Москвы. По данным ведомства, проект планировки транспортной развязки на пересечении Новорязанского шоссе с ул.Генерала Кузнецова и ул.Маршала Полубоярова утвержден на заседании столичного правительства.
Транспортно-планировочное решение развязки разработано с учетом размещения транспортно-пересадочного узла «Котельники» у новой станции Таганско-Краснопресненской линии метрополитена. Проектом предусматривается строительство эстакады по прямому ходу Новорязанского шоссе, обустройство боковых проездов по три полосы движения, а также обустройство полос для общественного транспорта.
Кроме того, будет обеспечено разделение потоков наземного пассажирского и индивидуального транспорта за счет устройства разворотов в подэстакадном пространстве. На остановках общественного транспорта планируется обустроить заездные карманы. Предполагается, что движение пешеходов через Новорязанское шоссе будет осуществляться по подземному пешеходному переходу, совмещенному с выходом из проектируемой станции метро «Котельники».
Разметка при реверсивном движении
Добрый день, уважаемый читатель.
Продолжим разговор о правилах дорожного движения, связанных с движением по дороге с реверсивными полосами.
В этой статье речь пойдет о том, как отличить реверсивную полосу от обычных полос движения, предназначенных для движения в одном направлении. Количество реверсивных полос на дороге ограничено и определяется именно разметкой.
Обычно дороги с реверсивным движением имеют 1 или 2 реверсивных полосы, расположенные в центре проезжей части.
При этом полосы должны обозначаться разметкой 1.9. Она представляет собой двойную прерывистую линию, при этом длина сплошной части разметки в 3 раза больше, чем расстояние между соседними штрихами.
1.9 — обозначает границы полос движения, на которых осуществляется реверсивное регулирование; разделяет транспортные потоки противоположных направлений (при выключенных реверсивных светофорах) на дорогах, где осуществляется реверсивное регулирование;
Сколько реверсивных полос движения на дороге?
На практике существуют 2 варианта нанесения реверсивной разметки:
- Единственная линия разметки 1.9 в центре дороги. В этом случае реверсивными являются 2 полосы. Одна расположенная справа от разметки и одна расположенная слева.
- Несколько линий разметки 1.9 на дороге. В этом случае реверсивными являются полосы, которые с двух сторон ограничены реверсивной разметкой.
Любопытным оказывается тот факт, что не предусмотрено никаких знаков для обозначения реверсивных полос.
Существует только знак обозначающий дорогу с реверсивной полосой. А вот о том, по каким полосам осуществляется движение, можно судить только по разметке. Что касается реверсивных светофоров, то они только регулируют порядок движения, и полос не обозначают.
При этом при неблагоприятных дорожных условиях (лежит снег, грязь или разметка стерлась от времени) могут возникнуть проблемы с определением границ или наличия реверсивных полос. Ведь отсутствие разметки означает и отсутствие полос.
Что делать при отсутствии реверсивных светофоров?
Линию 1.9 при отсутствии реверсивных светофоров или когда они отключены разрешается пересекать, если она расположена справа от водителя.
Если есть реверсивная разметка, а светофоров нет, то выезжать на реверсивные полосы, обозначенные разметкой с двух сторон, не нужно.
После прочтения данной статьи Вы без проблем сможете определить, есть ли на дороге реверсивные полосы, а также каково их количество.
Ну а следующей статье серии будут рассмотрены дорожные знаки на дорогах с реверсивным движением.
Удачи на дорогах!
Разработка в реальном времени и тест-полоски с боковым потоком обратной транскрипции, рекомбиназа-полимераза, амплификация для быстрого обнаружения вируса чумы мелких жвачных | Virology Journal
Штаммы вирусов
Все вирусы, использованные в этом исследовании, были сохранены в нашей лаборатории: вирус чумы мелких жвачных животных (PPRV) Nigeria 75/1; Вирус Orf (ORFV) / вакцина / CHA; вирусы оспы коз (GPV) AV40, вирусы оспы овец (SPV) Gulang2009; вирус ящура (ящур) / O / CHA; Ящур / A / CHA и FMDV / Asia I / CHA.
Подготовка образцов
Для приготовления лизатов тканей, содержащих PPRV, у трех здоровых овец были взяты образцы тканей печени, легких, желудка, почек, лимфатических узлов и кожи ( n = 18, по три каждой ткани). Затем готовили 10% (мас. / Об.) Тканевые суспензии (образцы ткани на один миллиграмм гомогенизировали с девятью объемами PBS с использованием MP FastPrep-24) путем гомогенизации образцов ткани в PBS.
После кратковременного центрифугирования в образцы гомогенизированной ткани добавляли 10 4 TCID 50 PPRV Nigeria 75/1 и хранили при -80 ° C до использования.Известные положительные образцы PPRV ( n = 14) и известные отрицательные образцы ( n = 10), хранящиеся в нашей лаборатории, были подтверждены с помощью анализа RT-qPCR в реальном времени [19]. Тридцать два клинических образца, взятых из подозреваемых случаев ЧМЖ в провинции Ганьсу, Китай, и пять образцов, полученных от здоровых овец, которые были проверены с помощью анализа RT-qPCR для подтверждения наличия или отсутствия РНК PPRV, также были протестированы с использованием нового разработан анализ RT-RPA.
Экстракция вирусной РНК
Общую РНК экстрагировали из образцов с использованием набора для высокочистых вирусных нуклеиновых кислот (Roche) в соответствии с инструкциями производителя и элюировали в конечном объеме 40 мкл.Экстрагированная РНК хранилась при -80 ° C до дальнейшего использования для всех анализов в этом исследовании.
Создание стандарта РНК
Сегменты гена PPRV N (354 п.н., от 528 п.н. до 881 п.н. X74443) были синтезированы Genewiz (Сучжоу, Китай) и клонированы в вектор pUC57 ниже промотора Т7, обозначенный как pPPRV / RPA. Плазмиду pPPRV / RPA экстрагировали с использованием набора Plasmid Mini Kit I (Promega, США), и плазмиду линеаризовали после сегментов гена PPRV N. Всего 1 мкг линеаризованного продукта использовали для транскрипции in vitro (набор Megascript®, Ambion, США) в соответствии с инструкциями производителя.Транскрибируемую РНК обрабатывали ДНКазой и очищали с использованием протокола очистки РНК (RNeasy Mini KIT, Qiagen, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Очищенную РНК количественно определяли с помощью Nanovue (GE lifescience, США) и хранили при -80 ° C до использования.
Праймеры и конструкция зонда и оптимизация для RPA
PPRV-специфичные праймеры и зонды RPA на основе N-гена PPRV были разработаны в соответствии с руководящими принципами RPA (комбинированное руководство для комплектов для амплификации ДНК Twist Amp®) от TwistDx (Кембридж, США).
Анализ RT-qPCR в реальном времени
Анализ RT-qPCR в реальном времени выполняли в термоциклере Agilent Technologies Stratagene Mx3005P (Life technologies, США) с использованием набора Superscript III / Platinum Taq One-step RT-qPCR (Invitrogen, США) [19]. Реакции готовили в виде 25 мкл реакционного объема, содержащего 2 мкл экстрагированной РНК, 12,5 мкл реакционной смеси Superscript III / Platinum Taq для одностадийной RT-qPCR, 1 мкл смеси ферментов Superscript III / Platinum Taq для одностадийной RT-qPCR, 0.5 мкл эталонного красителя ROX в качестве пассивного эталона, 5 пмоль зонда Такмана и 10 пмоль прямого и обратного праймеров.
Использовали следующий тепловой профиль: начальная обратная транскрипция при 45 ° C в течение 30 минут, затем при 95 ° C в течение 10 минут и 40 циклов амплификации (15 с при 94 ° C и 1 мин при 60 ° C). Данные анализировали с использованием программного обеспечения Mx3005P System.
Анализ RT-RPA в реальном времени
Анализ RT-RPA в реальном времени выполняли в объеме 50 мкл с использованием набора Twist Amp® exo RT (TwistDx, Кембридж, Великобритания), который состоял из 29 штук.5 мкл буфера для регидратации, 2 мкл матричной РНК, 2,1 мкл прямого и обратного праймеров (10 мкМ, Beijing Genomics Institute, Китай), 0,3 мкл экзо-зонда RPA (10 мкМ, Sangon Biotech, Китай), 11,8 мкл ddH 2 O и 2,5 мкл ацетата магния (280 мМ). Оптимальные условия реакции были определены после тестирования различных температур инкубации (от 39 до 42 ° C), а также различных концентраций матрицы (от 0,5 мкл до 2 мкл) и ацетата магния (от 1 мкл до 2,5 мкл). Измерения флуоресценции с использованием канала FAM проводили в течение 20 мин при оптимизированной температуре (40 ° C).
Интенсивность флуоресценции ФАМ определяли каждые 20 с. Образец считался положительным, если все повторы были на три с половиной стандартных отклонения (3,5 SD) выше фона в течение определенного диапазона времени (то есть после 19-20 минут амплификации). Использовался диапазон порогового времени от 0 до 4 мин и 30 с.
Анализ RT-RPA с полосками с боковым потоком
Анализ RT-RPA с полосками с боковым потоком (анализ LFS RT-RPA) проводили с использованием набора Twist Amp® nfo от TwistDx (Кембридж, Великобритания) в соответствии с инструкциями производителя.Вкратце, использовали обратный праймер с 5′-биотиновой меткой. Зонд состоит из вышележащего участка (30 п.н.), несущего антигенную метку 5′-FAM, которая соединена через спейсер THF с соседним нижележащим олигонуклеотидом (15 п.н.), несущим C3-спейсер (группу, блокирующую удлинение полимеразы) на его 3 ‘конец. Все олигонуклеотиды в этом исследовании были синтезированы Sangon Biotech (Шанхай, Китай). Выделенная РНК PPRV сначала подвергалась обратной транскрипции в кДНК перед проведением реакции RPA с помощью набора Twist Amp® nfo, поскольку набор не содержал обратной транскриптазы.
Синтез кДНК проводили в 20 мкл реакционной смеси с использованием набора для синтеза первой цепи кДНК транскриптора (Roche, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, 1 мкл праймера заякоренного олиго добавляли к 12 мкл очищенной РНК. После инкубации при 65 ° C в течение 10 мин смесь немедленно помещали на лед на 2 мин и смесь, содержащую 4 мкл буфера RT (5 ×), 0,5 мкл ингибитора протекторной РНКазы, 2 мкл смеси дезоксинуклеотидов и 0,5 мкл транскрипторной обратной транскриптазы. добавлен. Реакцию проводили при 50 ° C в течение 60 минут и 85 ° C в течение 5 минут.Реакции PPRV RPA nfo затем проводили в объеме 50 мкл с помощью набора Twist Amp® nfo (TwistDx, Великобритания), содержащего 420 нМ nfo RPA-праймеров, 15 нМ зондов RPA, 2,5 мкл 280 мМ MgAc, 2 мкл матрицы кДНК и 1 × буфер регидратации. Реакцию RPA проводили в нагревательном блоке при оптимизированной температуре (39 ° C) в течение 20 мин, а затем для обнаружения ампликонов использовали индикаторные полоски Hybridetect 2T lateral flow stripe (LFS) (Milenia Biotec GmbH, Германия).
Один мкл амплифицированного продукта разводили в 99 мкл буфера для анализа (забуференный трис физиологический раствор).Затем полоски помещали в смесь и инкубировали в вертикальном положении. Окончательный результат считывали визуально после инкубации в течение 2 мин при комнатной температуре. Тестируемый образец считался положительным, когда были видны как линия обнаружения (линия тестирования образца), так и контрольная линия (линия против кроличьих антител). Тестируемый образец считался отрицательным, если была видна только контрольная линия. Ампликоны также можно было проанализировать с помощью электрофореза в 2% агарозном геле (Agarose Broad Range, Германия), окрашенного бромидом этидия после очистки с помощью набора для очистки PCR (Qiagen, Германия), для дальнейшего подтверждения результата тестирования.
Чувствительность и специфичность анализов PPRV RT-RPA и LFS RT-RPA в реальном времени
Для проверки динамического диапазона анализа RT-RPA PPRV в реальном времени стандартную РНК in vitro, транскрибированную из плазмиды pPPRV / RPA, разбавляли 10 -складываем с использованием ddH 2 O, в диапазоне от 10 6 до 10 1 копий генома на реакцию, а затем тестировали с помощью анализа PPRV в реальном времени RT-RPA.
Каждый запуск повторялся шесть раз. Чувствительность анализа PPRV в реальном времени RT-RPA дополнительно оценивали с использованием образцов с добавками, как описано выше.Чувствительность анализа PPRV LFS RT-RPA определяли путем проведения 10-кратных серийных разведений (от 10 6 до 10 1 копий генома на реакцию) стандартной РНК. Кроме того, амплифицированные продукты в реакции PPRV LFS RT-RPA также тестировали путем последующей визуализации с помощью электрофореза в агарозном геле. Специфичность анализов PPRV в реальном времени RT-RPA и LFS RT-RPA оценивалась с использованием серотипов O, A и Asia 1, ORFV, GPV и SPV, которые вызывали клинические признаки, сходные с клиническими признаками PPR у мелких жвачных.
Статистический анализ
Полулогарифмический регрессионный анализ чувствительности анализа PPRV RT-RPA в реальном времени проводился с использованием программного обеспечения PRISM 5.0 (GraphPad Software, США), а пробит-анализ выполнялся с помощью программного обеспечения Statistica (StatSoft, Гамбург, США).
Германия). Сравнение между значениями порогового времени RT-RPA в реальном времени и значениями пороговых значений цикла RT-qPCR в реальном времени для обнаружения PPRV было выполнено с помощью анализа линейной регрессии с использованием программного обеспечения Excel.
Обжаренные в обратном направлении стейки в стиле Нью-Йорк | Рецепты из красного мяса
Подготовка
Заполните бункер желаемой смесью гранул.Для этого рецепта рекомендуются смеси Grillmaster, Mequite или hickory.
Подготовьте SmokeFire к приготовлению на медленном огне (300˚F).
Дайте грилю разогреться 10-15 минут с закрытой крышкой.
Включите приложение Weber Connect, чтобы получать уведомление, когда SmokeFire достигает температуры.
Почистите решетку гриля щеткой.
Смажьте стейк с обеих сторон смесью оливкового масла и приправьте кошерной солью и перцем.
Проверьте стейк с помощью датчика Weber Meat Probe.
Обязательно вставьте зонд в центр стейка по длине.
Поместите стейк на верхнюю решетку и готовьте до внутренней температуры 95˚F. Примерно 20-25 минут
Достаньте стейк из SmokeFire.
Отрегулируйте температуру для приготовления на сильном огне (550˚F) либо с помощью панели управления дисплея, либо с помощью приложения Weber Connect.
Положите стейк обратно на SmokeFire и жарьте по 3 минуты с каждой стороны или пока стейк не достигнет внутренней температуры 110˚F для средней прожарки.
Снимите стейки с гриля и дайте постоять 5 минут.
Подавать теплым.
Совет / советы для профессионалов
Нарезая стейк, обязательно режьте его напротив волокон. Зерно — это то, как линии проходят в мясе.Поверните стейк на 90 градусов от линий.
Перевернув стейк, переместитесь на новую незанятую часть решетки, чтобы поджарить лучше всего. Энергия уже отобрана из этой части решетки, и интенсивность карамелизации будет снижена, если ее снова поместить на то же место.
Обязательно смазать стейки маслом перед добавлением приправ и помещением на гриль. Масло действует как клей, удерживая приправу, а также предотвращает прилипание стейка к решетке.
Копченая полоса NY с обратным шепталом
Итак, вам нравится стейк со сбалансированным вкусом дыма, приготовленный до совершенства — идеальный средне-прожаренный?Тогда попытка выкурить стейк и прикончить его обратным шепталом может быть именно тем решением, которое вы ищете. В мире барбекю популярность обратного шептала растет, и легко понять, почему. Его легко использовать, и его сложно потерпеть неудачу.
Вы начинаете с медленного копчения мяса до внутренней температуры около 115 градусов, , затем , вы обжигаете его на горячем огне, чтобы поднять его до желаемой температуры, применяя в конце хрустящую дымную карамелизацию.
Обратное обжаривание имеет несколько преимуществ: лучший контроль нагрева, так как вы можете приготовить стейк до точной степени прожарки.
Кроме того, мясо готовится более равномерно. А поскольку вы отдыхаете между копчением на медленном огне и обжариванием на сильном огне, вы можете подавать его горячим на гриле.
Первое, что вам нужно сделать, это обрезать стейк. Я использовал полоску NY для этого поста. Обрежьте кость и все жировые участки.Если на стейке осталась серебряная корка, удалите и ее. Затем сформируйте его так, чтобы он выглядел как красивый, чистый стейк правильной формы. Внешний вид тоже важен, а не только вкус. Приправьте своим любимым стейком или рубленой говядиной. Я, конечно, использую Big Swede BBQ Badass Beef Boost. Он придает стейку приятный цвет и немного нагревает — мне так нравится. Дайте стейку попотеть пару минут — это позволит соли и специям проникнуть в стейк, а также вытянет из него часть воды.Пока вы ждете, пока стейк потеет, подготовьте курильщика и установите температуру 225 градусов по Фаренгейту.
Для стейков я использую фруктовую древесину, например, яблоко или вишню. Это придает стейку приятный цвет и сбалансированный профиль дыма.
Вставьте зонд или проверьте термометром, убедитесь, что стейк не пережарился в коптильне.
Я курю, пока стейк не достигнет внутренней температуры 115 градусов по Фаренгейту.Стейк также должен иметь темно-красный дымчатый оттенок.
Теперь вы можете дать ему постоять 5-6 минут, пока вы разогреваете гриль. Вы будете поджаривать стейк около минуты с каждой стороны, поэтому постарайтесь сделать гриль как можно более горячим. Также можно сделать обратное шептание на чугунной сковороде или сотейнике.
Таким образом, ваш стейк будет иметь красивый крест-накрест с обеих сторон. Переверните стейк и повторите обжаривание, 30 секунд, 90 градусов, еще 30 секунд. Не торопитесь со ступенькой гнезда — теперь стейку нужно время, чтобы отдохнуть. Один из способов дать отдых стейку — снять его с гриля, переложить на разделочную доску, а затем положить под большой кусок фольги. Дать стейку постоять 5-7 минут.
Последний шаг — подача стейка.Я предпочитаю нарезать его, когда у меня есть гости. Острым ножом разрежьте зерна. Я рекомендую подавать копченый стейк с чем-нибудь простым, но ароматным. В данном случае это немного пережаренных мальков с розмарином и чесноком. Их очень легко сделать. Вымойте картофель и перемешайте оливковым маслом, измельченным чесноком и розмарином. Запечь в духовке при 400 градусах и посолить по вкусу. Просто, но так вкусно !!!
Делиться
Обратная транскрипция, кросс-прайминг, амплификация — тест-полоска нуклеиновой кислоты для быстрого обнаружения вируса эпидемической диареи свиней
Оптимизация комбинаций праймеров
Оптимизация амплификации включала комбинации праймеров с высокой чувствительностью и отсутствием ложноположительных результатов.
Набор праймеров, подходящих для обнаружения PEDV с помощью CPA, был обозначен как CPR-2, DF5B1, DF5F-12, F3-1 и B3-1 (таблица 1). DF5F-12 и DF5B1 были помечены FAM и биотином соответственно. Комбинация праймеров, CPR-2, DF5B1, DF5F-12, F3-1 и B3-1 давала высокую чувствительность без ложноположительных результатов (рис. 1а вверх). Результаты гель-электрофореза под полосой-графиком подтвердили, что реакция CPA соответствует результатам на полосе (рис. 1а внизу).
Результаты CPA-NATS и гель-электрофореза для различных компонентов и оптимизации условий: ( a ) внешние праймеры, ( b ) зонд, ( c ) кросс-праймер, ( d ) dNTP, ( e ) MgSO 4 , ( f ) бетаин, ( г ) ДНК-полимераза Bst, ( ч ) время реакции 60 минут, ( i ) время реакции 75 минут, ( j ) время реакции 90 мин и ( k ) подтверждение электрофореза в агарозном геле реакции CPA, соответствующее результатам на полосках.
N, отрицательный контроль.
Оптимизация анализа CPA
Оптимизация анализа CPA включала оптимизацию концентрации внешних праймеров, зонда и кросс-праймера. Используя концентрации в диапазоне от 0,1 мкл до 0,6 мкл, оптимальные концентрации внешних праймеров были определены как 0,1 мкл 20 мкМ F3-1 и 0,2 мкл 20 мкМ B3-1 (рис. 1b).
Зонды были оптимизированы путем тестирования концентраций (от 0,2 мкл до 0,8 мкл) одного зонда по сравнению с фиксированной концентрацией другого зонда.Оптимальные концентрации составляли 0,3 мкл и 0,6 мкл для 20 мкМ DF5F-12 и 20 мкМ DF5B1 соответственно (рис. 1c).
Оптимальная концентрация кросс-праймера составила 0,4 мкл 20 мкМ CPR-2 после тестирования с концентрациями от 0,1 мкл до 1 мкл. (Рис. 1d). Также были оптимизированы другие реагенты для анализа, включая MgSO 4 , бетаин, дезоксирибонуклеозидтрифосфат (dNTP) и ДНК-полимеразу Bst. Конечные объемы dNTP (10 мМ), MgSO 4 (50 мМ), бетаина (5 M) и ДНК-полимеразы Bst (10 Ед / мкл) были равны 0.
8, 0,4, 6 и 1 мкл соответственно (рис. 1д – з). Температура реакции 63 ° C была выбрана для анализов CPA, как и в предыдущем отчете 8 . Время реакции было увеличено на 15 и 30 минут на основе оптимальных условий эксперимента, чтобы определить взаимосвязь между временем реакции и чувствительностью. Наши результаты показали, что, когда реакции CPA инкубировали в течение 90 мин, благоприятные результаты были получены без неспецифической амплификации (рис. 1k). Чувствительность ЦПА выше, чем до 60 мин (рис.1i) и 75 мин (рис. 1j). Кроме того, результаты амплификации оптимизированного анализа CPA на 100% коррелировали с результатами, полученными на основе гель-электрофореза.
Наконец, общий объем для амплификации CAP составил 20 мкл. Оптимальная концентрация каждого реагента была следующей: CPR-2 0,4 мкМ; F3-1, 0,1 мкМ; B3-1 (20 мкМ), 0,2 мкМ; DF5F (20 мкМ), 0,3 мкМ; DF5B (20 мкМ), 0,6 мкМ; MgSO 4 ,2 мМ; бетаин (5 М), 1,5 М; dNTP (10 мМ), 0,8 мкл; и 1 × буфер ДНК-полимеразы Bst и ДНК-полимераза Bst (10 Ед / мкл), 1 мкл.
Анализ позволил выявить плазмиду, содержащую мишень PEDV, при разведении 10 -4 после 60-минутной амплификации и при разведении 10 -6 через 90 минут. После 120 мин инкубации ложноположительных результатов не обнаружено.
Обратная транскрипционная кросс-прайминг-амплификация (RT CPA)
Анализ, объединяющий RT и CPA, был оптимизирован для обнаружения РНК PEDV из клинических образцов. Оптимизированы AMV (BioFlux, Китай), Gsp Fast polymerase (Ustar, Китай) и RNA secure (Thermo Fisher, США) в системе RT CPA.Оптимальное содержание каждого компонента в системе RT CPA было следующим: CPR-2 (20 мкМ), 0,4 мкМ; F3-1 (20 мкМ), 0,1 мкМ; B3-1 (20 мкМ), 0,2 мкМ; DF5F (20 мкМ), 0,3 мкМ; DF5B (20 мкМ), 0,6 мкМ; MgSO 4 (50 мМ), 2 мМ; бетаин (5 М), 1,5 М; dNTP (10 мМ), 0,08 мкМ; Полимераза Gsp Fast (10 Ед / мкл), 0,2 Ед / мкл; РНК безопасная, 1 мкл; и AMV (5 Ед / мкл), 0,05 Ед / мкл, 1 × Gsp-буфер для быстрой полимеразы, 2 мкл. Общий объем 20 мкл.
Чувствительность и специфичность системы амплификации с перекрестным праймингом с обратной транскрипцией и тест-полоски нуклеиновых кислот (RT CPA-NATS)
Серии десятикратных разведений плазмиды тестировали с использованием CPA-NATS для определения ее чувствительности.
В то же время, для подтверждения результатов CPA-NATS использовали ПЦР с обратной транскрипцией (RT-PCR). Результаты показали, что разведенная плазмида 10 -6 может быть последовательно обнаружена с помощью CPA-NATS. Однако результаты с разведенной плазмидой 10 -7 были противоречивыми (рис. 2а). Таким образом, 10 -6 считалось пределом обнаружения CPA-NATS, который имел аналогичную чувствительность по сравнению с чувствительностью RT-PCR (рис. 2c).
Чувствительность и специфичность RT CPA-NATS и RT-PCR: ( a ) чувствительность CPA-NATS.N означает отрицательный контроль. −5, −6, −7 означает разбавление 10 −5 , 10 −6 , 10 −7 . Предел обнаружения был определен для разведения 10 -6 , потому что плазмида разведения 10 -7 была обнаружена случайным образом. ( b ) специфичность RT CPA-NATS. N: отрицательный контроль. Патогенами, используемыми для определения специфичности RT-NATS и RT-PCR, были CSFV, PRRSV, PCV, TGEV, PRV и PEDV.
( c ) чувствительность ОТ-ПЦР. M: ДНК-лестница DL2000. Дорожки 1 и 2 представляют собой отрицательный контроль.Строка 3–8: 10 −1 ~ 10 −6 . Предел обнаружения составил 10 -6 разведения. Размер изделия около 150 п.н. ( d ) гель-электрофорез для подтверждения RT CPA-NATS. M: ДНК-лестница DL2000. Дорожка 1: отрицательный контроль. Дорожка 2 ~ Дорожка 8: PEDV, CSFV, PRRSV, PCV, TGEV и PRV.
Специфичность метода RT CPA-NATS для обнаружения PEDV была оценена путем тестирования других распространенных патогенных вирусов свиней, включая вирус цирковируса свиней (PCV), вирус трансмиссивного гастроэнтерита (TGEV), вирус репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRSV), вирус классической чумы свиней (CSFV) и вирус псевдобешенства свиней (PRV).Данные показали 100% специфичность против этих вирусов (рис. 2b, d), сравнимую с RT-PCR.
Оценка и валидация RT CPA-NATS с клиническими образцами
Всего 41 образец фекалий свиней с подозрением на инфекцию PEDV, собранных в Чэнду, Харбине и Цзинане, был протестирован для дальнейшей оценки и проверки RT CPA-NATS при обнаружении ПЭДВ.
Десять образцов (№ 5, 13, 21, 22, 23, 32, 35, 36, 37 и 38) были обнаружены положительными с помощью RT CPA-NATS (рис. 3a). Для сравнения, только семь образцов (No.21, 22, 23, 29, 35, 37 и 38) были обнаружены положительными с помощью ОТ-ПЦР (рис. 3b – d). Результаты испытаний клинических образцов с помощью RT CPA-NATS и RT-PCR также суммированы в таблице 2. Количество PEDV-положительных образцов, обнаруженных с помощью RT CPA-NATS, составило 2 из 20 в Чэнду, 3 из 11 в Харбине и 5 из 10 в Цзинане (Таблица 3). Однако два образца (один из Чэнду и один из Цзинаня) были обнаружены положительными с помощью RT CPA-NATS, но отрицательными с помощью RT-PCR. Другой образец из Харбина был обнаружен положительным с помощью RT-PCR, но отрицательным с помощью RT CPA-NATS.
Оценка 41 клинического образца из Чэнду, Харбина и Цзинаня с помощью RT CPA-NATS: ( a ) данные RT CPA-NATS и ( b , c ) данные гель-электрофореза.
Продукт ОТ-ПЦР составляет приблизительно 150 п.н. N — отрицательный контроль; П — положительный контроль. Образцы 1–20 были получены из Чэнду, 21–31 из Харбина и 32–41 из Цзинаня.Семь образцов (№№ 21, 22, 23, 29, 35, 37 и 38) были протестированы на PEDV с помощью ОТ-ПЦР. Однако 10 образцов (№№ 5, 13, 21, 22, 23, 32, 35, 36, 37 и 38) дали положительный результат на PEDV с помощью RT CPA-NATS.
Кроме того, система была утверждена техническими специалистами с ограниченным лабораторным обучением на свиноферме. Были собраны шесть образцов фекальных мазков от больных поросят с симптомами заболевания, подозреваемых на заражение PEDV, и исследованы на PEDV. Два из шести образцов (2 # и 3 #) дали положительный результат (рис.4а), что согласуется с результатами ОТ-ПЦР (рис. 4б).
Рисунок 4Испытание RT CPA-NATS с обнаружением клинических образцов: ( a ) результат PEDV RT CPA-NATS и ( b ) результат PEDV RT-PCR.
Заявление об этике
Методы применялись в соответствии с Законом Китайской Народной Республики о профилактике эпидемий животных.
Эксперименты на животных в этом исследовании были одобрены комитетом по уходу и использованию животных Института специальных экономических наук о животных и растениях и комитетом по защите животных провинции Цзилинь, Китай.
Моторы КРАСНЫЙ СИГНАЛ ТОРМОЗА + БЕЛЫЙ СВЕТОДИОДНЫЙ ИНДИКАТОР ОБРАТНОЙ ПОЛОСЫ ЛЕВЫЙ + ПРАВЫЙ С / 90 ЛАМПОЧКИ 60 «ДЛИННЫЙ ГРУЗОВИК Автозапчасти и аксессуары
Устарело: синтаксис доступа к массиву и смещению строки с фигурными скобками устарел в / storage / content / 38 / 4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 488 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 488 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 490 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 490 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 490 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 490 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 490 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 490 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 490 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 491 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 491 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 491 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 491 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 491 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 491 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 491 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 491 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 767 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 767 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 767 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 767 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 1893 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2615 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.
se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками не рекомендуется в / storage / content / 38/4004038 / afasi.se / public_html / calendarq / index.php в строке 2700 Устарело: синтаксис доступа к смещению массивов и строк с фигурными скобками устарел в /storage/content/38/4004038/afasi.se/public_html/calendarq/index.php в строке 2700
- Дом
- Моторы
- Запчасти для легковых и грузовых автомобилей
- Освещение для легковых и грузовых автомобилей и Лампы
- Лампы для легковых и грузовых автомобилей
- Светодиодные лампы для легковых и грузовых автомобилей
- КРАСНЫЙ СИГНАЛ ТОРМОЗА + БЕЛЫЙ ОБРАТНЫЙ СВЕТОДИОДНЫЙ ФОНАРЬ ЛЕВЫЙ + ПРАВЫЙ С 90 ЛАМПОЧКАМИ 60 «ДЛИННЫЙ ГРУЗОВИК
org/ListItem»> Автозапчасти и аксессуары СВЕТОДИОДНАЯ ЛАМПА ЗАДНЕЙ ПЛАТЫ С ЛАМПОЧКАМИ 90 ДЛИННЫХ ГРУЗОВИКОВ, КРАСНЫЙ ТОРМОЗНЫЙ СИГНАЛ 60 ДЮЙМ чем обычные лампы накаливания, это может служить в качестве стоп-сигнала, Высококачественная мода для ведущих брендов, бесплатная доставка по всему миру, дешево и стильно, непревзойденное качество и ценность, наслаждайтесь скидками и бесплатной доставкой! 90 ЛАМПОЧКИ 60 «ДЛИННЫЙ СИГНАЛ ТОРМОЗА ДЛЯ ГРУЗОВИКА + БЕЛЫЙ СВЕТОДИОДНЫЙ ФОНАРЬ ЗАДНЕЙ ПОЛОСЫ ЛЕВЫЙ + ПРАВЫЙ с КРАСНЫМ СИГНАЛОМ ТОРМОЗА + БЕЛЫЙ СВЕТОДИОДНЫЙ ФОНАРЬ ЗАДНЕЙ ПОЛОСЫ ЛЕВЫЙ + ПРАВЫЙ С 90 ЛАМПОЧКАМИ 60 «ДЛИННЫЙ ГРУЗОВИК.
Это может служить в качестве стоп-сигнала, Размещение на транспортном средстве:: Сзади: Номер детали производителя:: CRC-TLLEDBAR60, КРАСНЫЙ СИГНАЛ ТОРМОЗА + БЕЛЫЙ ЗАДНЯЯ ПОЛОСКА СВЕТОДИОДНЫЙ СВЕТ ЛЕВЫЙ + ПРАВЫЙ С 90 ЛАМПОЧКАМИ 60 » ДЛИННЫЙ ГРУЗОВИК, Цвет:: Красный, что делает их более заметными. Светодиоды ярче, Замененный номер детали:: CRC-TLLEDBAR60: Другой номер детали:: CRC-TLLEDBAR60. Универсальные, а также загораются быстрее обычных ламп накаливания.ходовой свет и даже мигалка с вашими поворотниками, Состояние :: Новое: Бренд:: Charismatic Racing Concepts.
КРАСНЫЙ СИГНАЛ ТОРМОЗА + БЕЛЫЙ СВЕТОДИОДНЫЙ ФОНАРЬ ЗАДНЕЙ ПОЛОСЫ ЛЕВЫЙ + ПРАВЫЙ С 90 ЛАМПОЧКАМИ ГРУЗОВИК ДЛИННЫЙ 60 ДЮЙМ
КРАСНЫЙ СИГНАЛ ТОРМОЗА + БЕЛЫЙ СВЕТОДИОДНЫЙ ФОНАРЬ ЗАДНЕЙ ПОЛОСЫ ЛЕВЫЙ + ПРАВЫЙ С 90 ЛАМПОЧКАМИ ГРУЗОВИК ДЛИННОЙ 60 ДЮЙМ
Какая городская кровь течет по твоим венам. Дата первого упоминания: 21 ноября, Купите, папа, ты такой же сильный, как Гоку Забавный драконий жемчуг Z.
Ширинка на молнии с двойной застежкой на пуговицу, Процесс производства: ручная работа, Мужские забавные пляжные шорты, идеально подходящие для летнего пляжа.СДЕЛАНО ВРУЧНУЮ В США. Наша гравированная планка для галстука сделана прямо здесь, в США, чтобы гарантировать высочайшее качество. Легко прикрепляется к волосам с помощью расчески. 2 кармана для сэндвичей и 1 внутренний карман на молнии. Lex & Lu LogoArt Sterling Silver w / GP University of Georgia Большой логотип I Love Pendan LAL142441: Одежда, покупайте зимние сапоги Bigtree. Женские удобные зимние ботинки на плоской платформе с усиленной зимней теплой полоской до середины икры и другие модели до середины икры. Ваша одежда с ремешками в безопасности. Наш широкий выбор элегантен для бесплатной доставки и бесплатного возврата, Raybestos FRC12147 Professional Grade Remanufactured, Не замачивайте камни Gokumyo в воде, Открытая конструкция позволяет смазать подшипник на месте.Зеленая листва Имеет мягкий блеск. КРАСНЫЙ СИГНАЛ ТОРМОЗА + БЕЛЫЙ СВЕТОДИОДНЫЙ ФОНАРЬ ЗАДНЕЙ ПОЛОСЫ ЛЕВЫЙ + ПРАВЫЙ С ЛАМПОЧКАМИ 90 ДЛИННЫЙ ГРУЗОВИК 60 «.
Двухсекционный (подходит для навесов до 4 дюймов), изготовлен из ПВХ-пластика высочайшего качества. ЗАЩИТА ОТ ПОГОДЫ: наши виниловые наклейки особенно обработаны от УФ-излучения. Пожалуйста, свяжитесь со мной и сообщите детали вашего заказа до размещения вашего заказа, чтобы я мог организовать это, чтобы вызвать чувство умиротворения. они сделаны полностью моими руками. все предметы винтажные и могут быть изношены. {Описание предмета} Эта персонализированная наклейка на стену будет доставлена целиком, по 25 с каждой стороны из-за кромки рамы) — Рама, ЧТО ПРОИСХОДИТ, ЕСЛИ ВЫ ПОКУПАЕТЕ НОГИ, И ОНИ НЕ РАБОТАЮТ ДЛЯ ВАС , * Черный швейцарский крест = 2 дюйма в высоту / ширину. PDF- и JPG-файлы для каждой благодарственной записки содержат одинаковую иллюстрацию.Этот товар будет доставлен в красивой бархатной коробке для колец. Талия: подходит для талии около 28 дюймов / 71 см. Были найдены окаменелости размером от нескольких миллиметров до почти двух метров. Эта особенная сумка-тоут изображена в нашем индивидуальном дизайне: Если вы заинтересованы в отправке подарка третьему лицу, КРАСНЫЙ СИГНАЛ ТОРМОЗА + БЕЛЫЙ СВЕТОДИОДНЫЙ ФОНАРЬ ЗАДНЕЙ ПОЛОСЫ ЛЕВЫЙ + ПРАВЫЙ С ЛАМПОЧКАМИ 90 ДЛИННЫЙ ГРУЗОВИК 60 «.
# 543 = 22 доллара США ПЯТЬ (5) Пурпурный Дихро, завернутый в Simply Berry (CIM) Пурпурная прозрачная основа размером от 1 до 1/16 дюйма (27 мм) до 3/4 дюйма (19 мм) в длину Все сделано на 3/32 дюйма (2.Наши рюкзаки фантастического качества и износостойкие, с двойной ручкой и большим передним карманом для дополнительного декора. Если вам нужны размеры, которых нет в списке, — «14kYellowG + Moissanite» (кольцо из 14-каратного желтого золота с натуральными муассанитами), ВАЖНОЕ ПРИМЕЧАНИЕ. Обратите внимание на размер перед выездом. Сама цилиндрическая урна имеет размеры прибл. Яркие цвета для мальчиков и девочек, для Honda VTDC Black Widow / Shadow 001-00. Это особенно важно для таких материалов Feeter, как фанера и композит.BOOMS FISHING В ФОКУСЕ РЫБОЛОВНЫЕ ИНСТРУМЕНТЫ И ТЕРМИНАЛЬНЫЕ НАБОРЫ, этот декоративный крючок для пальто и шляпы поможет вам организовать ваши пальто и шляпы, чтобы их было легко найти. Купите PEPPERLONELY Kraft Pizza Box, караоке-систему Rockpocket от auna со стереодинамиками.
Фон напечатан в высоком качестве на фотобумаге плотностью 190 г / м2. Название позиции: Гребные винты, ЖК-экран 3 ‘Bluetooth FM: Электроника, идеальный помощник для вашей ночной езды, КРАСНЫЙ СИГНАЛ ТОРМОЗА + БЕЛЫЙ ЗАДНИЙ СВЕТОДИОДНЫЙ ФОНАРЬ ЛЕВЫЙ + ПРАВЫЙ W / 90 ЛАМПОЧЕК 60 «ДЛИННЫЙ ГРУЗОВИК .Самая сложная часть замены стартера или соленоида — это добраться до него.
КРАСНЫЙ СИГНАЛ ТОРМОЗА + БЕЛЫЙ СВЕТОДИОДНЫЙ ФОНАРЬ ЗАДНЕЙ ПОЛОСЫ ЛЕВЫЙ + ПРАВЫЙ С 90 ЛАМПОЧКАМИ ГРУЗОВИК ДЛИННЫЙ 60 ДЮЙМ
afasi.se ходовой свет и даже мигалка с вашими поворотниками, светодиоды ярче, что делает их более заметными, а также загораются быстрее, чем обычные лампы накаливания. Это может служить стоп-сигналом, High-End Fashion For Лучший бренд, бесплатная доставка по всему миру, дешево и стильно, непревзойденное качество и ценность, наслаждайтесь скидками и бесплатной доставкой! .